DELLA սպիտակուցները պահպանվում են վարպետի կողմիցաճի կարգավորիչներորոնք կենտրոնական դեր են խաղում բույսերի զարգացման վերահսկման գործում՝ ի պատասխան ներքին և շրջակա միջավայրի ազդակների: DELLA-ն գործում է որպես տրանսկրիպցիոն կարգավորիչ և ներգրավվում է թիրախային պրոմոտորների մեջ՝ կապվելով տրանսկրիպցիոն գործոնների (TF) և հիստոն H2A-ի հետ իր GRAS տիրույթի միջոցով: Վերջերս կատարված ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ DELLA-ի կայունությունը հետտրանսլյացիոն կերպով կարգավորվում է երկու մեխանիզմով՝ ֆիտոհորմոն գիբերելինով առաջացրած պոլիուբիկվիտինացում, որը հանգեցնում է դրա արագ քայքայման, և փոքր ուբիկվիտինանման մոդիֆիկատորների (SUMO) կոնյուգացիա՝ դրա կուտակումը մեծացնելու համար: Բացի այդ, DELLA-ի ակտիվությունը դինամիկ կերպով կարգավորվում է երկու տարբեր գլիկոզիլացումներով. DELLA-TF փոխազդեցությունը ուժեղանում է O-ֆուկոզիլացմամբ, բայց արգելակվում է O-կապված N-ացետիլգլյուկոզամինի (O-GlcNAc) մոդիֆիկացիայով: Այնուամենայնիվ, DELLA ֆոսֆորիլացման դերը մնում է անհասկանալի, քանի որ նախորդ ուսումնասիրությունները ցույց են տվել հակասական արդյունքներ՝ սկսած այն արդյունքներից, որոնք ցույց են տալիս, որ ֆոսֆորիլացումը խթանում կամ նվազեցնում է DELLA-ի քայքայումը, մինչև այլ արդյունքներ, որոնք ցույց են տալիս, որ ֆոսֆորիլացումը չի ազդում դրա կայունության վրա: Այստեղ մենք նույնականացնում ենք ֆոսֆորիլացման տեղամասերը REPRESSOR-ում:ga1-3(RGA, AtDELLA) մաքրված զանգվածային սպեկտրոմետրիկ վերլուծության միջոցով Arabidopsis thaliana-ից և ցույց են տալիս, որ երկու RGA պեպտիդների ֆոսֆորիլացումը PolyS և PolyS/T շրջաններում նպաստում է H2A կապմանը և ուժեղացնում RGA ակտիվությունը: RGA-ի կապը թիրախային պրոմոտորների հետ: Նշենք, որ ֆոսֆորիլացումը չի ազդում RGA-TF փոխազդեցությունների կամ RGA կայունության վրա: Մեր ուսումնասիրությունը բացահայտում է մոլեկուլային մեխանիզմը, որի միջոցով ֆոսֆորիլացումը առաջացնում է DELLA ակտիվություն:
DELLA ֆունկցիայի կարգավորման մեջ ֆոսֆորիլացման դերը պարզաբանելու համար կարևոր է in vivo DELLA ֆոսֆորիլացման տեղամասերը նույնականացնել և բույսերում ֆունկցիոնալ վերլուծություններ կատարել: Բույսերի քաղվածքների աֆինային մաքրման և MS/MS վերլուծության միջոցով մենք RGA-ում մի քանի ֆոսֆոզիտներ նույնականացրինք: GA անբավարարության պայմաններում RHA ֆոսֆորիլացումը մեծանում է, բայց ֆոսֆորիլացումը չի ազդում դրա կայունության վրա: Կարևոր է նշել, որ co-IP և ChIP-qPCR անալիզները ցույց են տվել, որ RGA-ի PolyS/T շրջանում ֆոսֆորիլացումը խթանում է դրա փոխազդեցությունը H2A-ի հետ և դրա կապը թիրախային պրոմոտորների հետ՝ բացահայտելով այն մեխանիզմը, որով ֆոսֆորիլացումը ինդուկցնում է RGA ֆունկցիան:
RGA-ն հավաքագրվում է թիրախային քրոմատինի համար՝ LHR1 ենթադոմենի և TF-ի փոխազդեցության միջոցով, ապա կապվում է H2A-ի հետ՝ դրա PolyS/T շրջանի և PFYRE ենթադոմենի միջոցով, ձևավորելով H2A-RGA-TF համալիրը՝ RGA-ն կայունացնելու համար: Pep 2-ի ֆոսֆորիլացումը DELLA տիրույթի և GRAS տիրույթի միջև գտնվող PolyS/T շրջանում անհայտ կինազի կողմից ուժեղացնում է RGA-H2A կապը: Rgam2A մուտանտ սպիտակուցը վերացնում է RGA ֆոսֆորիլացումը և ընդունում է սպիտակուցի այլ կոնֆորմացիա՝ H2A կապմանը խանգարելու համար: Սա հանգեցնում է TF-rgam2A անցողիկ փոխազդեցությունների անկայունացմանը և rgam2A-ի դիսոցացիայի թիրախային քրոմատինից: Այս նկարը պատկերում է միայն RGA-միջնորդավորված տրանսկրիպցիոն ռեպրեսիան: Նմանատիպ օրինաչափություն կարելի է նկարագրել RGA-միջնորդավորված տրանսկրիպցիոն ակտիվացման համար, բացառությամբ այն բանի, որ H2A-RGA-TF համալիրը կխթանի թիրախային գենի տրանսկրիպցիան, իսկ rgam2A-ի դեֆոսֆորիլացումը կնվազեցնի տրանսկրիպցիան: Նկարը փոփոխվել է Հուանգի և այլոց կողմից:21:
Բոլոր քանակական տվյալները վիճակագրորեն վերլուծվել են Excel-ի միջոցով, և նշանակալի տարբերությունները որոշվել են Ստյուդենտի t թեստի միջոցով: Նմուշի չափը նախնական որոշելու համար վիճակագրական մեթոդներ չեն օգտագործվել: Վերլուծությունից որևէ տվյալ չի բացառվել. փորձը պատահականացված չի եղել. հետազոտողները չեն անտեսել փորձի ընթացքում տվյալների բաշխումը և արդյունքների գնահատումը: Նմուշի չափը նշված է նկարի լեգենդում և սկզբնաղբյուրի տվյալների ֆայլում:
Ուսումնասիրության դիզայնի վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկությունների համար տե՛ս այս հոդվածին կից «Բնական պորտֆոլիոյի հաշվետվության ամփոփագիրը»։
Մասս-սպեկտրոմետրիայի պրոտեոմիկայի տվյալները ProteomeXchange կոնսորցիումին տրամադրվել են PRIDE66 գործընկերային պահոցի միջոցով՝ PXD046004 տվյալների հավաքածուի նույնականացուցիչով: Այս ուսումնասիրության ընթացքում ստացված մնացած բոլոր տվյալները ներկայացված են Լրացուցիչ տեղեկատվության, Լրացուցիչ տվյալների ֆայլերի և Հում տվյալների ֆայլերի բաժիններում: Այս հոդվածի համար տրամադրվել են աղբյուրի տվյալները:
Հրապարակման ժամանակը. Նոյեմբերի 08-2024