Բույսերի և պաթոգենների նյութեր
Սորգոյի ասոցիացիայի քարտեզագրման պոպուլյացիան, որը հայտնի է որպես սորգոյի փոխակերպման պոպուլյացիա (SCP), տրամադրվել է Իլինոյսի համալսարանի (այժմ՝ UC Davis) դոկտոր Փեթ Բրաունի կողմից: Այն նկարագրվել է նախկինում և իրենից ներկայացնում է լուսապերիոդային անզգայունության և փոքր հասակի փոխակերպված բազմազան գծերի հավաքածու՝ ԱՄՆ միջավայրերում բույսերի աճն ու զարգացումը հեշտացնելու համար: Այս ուսումնասիրության մեջ օգտագործվել է այս պոպուլյացիայի 510 գիծ, չնայած վատ բողբոջման և որակի վերահսկման այլ խնդիրների պատճառով բոլոր երեք հատկանիշների վերլուծության մեջ չեն օգտագործվել բոլոր գծերը: Վերջնական արդյունքում 345 գծերից ստացված տվյալները օգտագործվել են քիտինային արձագանքի վերլուծության համար, 472 գիծ՝ flg22 արձագանքի և 456 գիծ՝ TLS դիմադրության համար:Բ. կուկեիLSLP18 շտամը ստացվել է Արկանզասի համալսարանի դոկտոր Բերտ Բլումից։
MAMP արձագանքի չափում
Այս ուսումնասիրության մեջ օգտագործվել են երկու տարբեր MAMP-ներ՝ flg22-ը (Genscript կատալոգ # RP19986) և քիտինը: Սորգոյի բույսերը աճեցվել են ջերմոցում հողով (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) լցված հարթ տարածքների վրա դրված ներդիրներով: Բույսերը ջրվել են նմուշների հավաքումից մեկ օր առաջ՝ հավաքման օրը տերևների ավելորդ խոնավությունից խուսափելու համար:
Գծերը պատահականորեն ընտրվել են և, լոգիստիկ պատճառներով, տնկվել են 60 տողից բաղկացած խմբաքանակներով: Յուրաքանչյուր գծի համար տնկվել է երեք «աման», որոնցից յուրաքանչյուրում երկու սերմ է եղել: Հաջորդ խմբաքանակները տնկվել են նախորդ խմբաքանակի մշակումից հետո, մինչև ամբողջ պոպուլյացիայի գնահատումը: Երկու MAMP-ների համար անցկացվել է երկու փորձնական շրջան՝ երկու շրջաններում վերստին պատահականացված գենոտիպերով:
ROS անալիզները կատարվել են նախկինում նկարագրվածի պես: Հակիրճ ասած, յուրաքանչյուր գծի համար վեց սերմ տնկվել է 3 տարբեր ամանների մեջ: Արդյունքում ստացված սածիլներից ընտրվել են երեքը՝ հիմնվելով միատարրության վրա: Չեն օգտագործվել այն սածիլները, որոնք անսովոր տեսք ունեին կամ զգալիորեն ավելի բարձր կամ կարճ էին, քան մեծամասնությունը: Երեք տարբեր 15-օրյա սորգոյի բույսերի 4-րդ տերևի ամենալայն մասից կտրվել են 3 մմ տրամագծով չորս տերևային սկավառակներ: Երկու բույսերից մեկական սկավառակ յուրաքանչյուր տերևի համար և մեկ բույսից երկու սկավառակ, որտեղ երկրորդ սկավառակը դարձել է ջրի վերահսկողություն (տե՛ս ստորև): Սկավառակները առանձին լողացվել են 50 մկլ H2O-ի վրա սև 96-խոռոչանոց ափսեի մեջ, կնքվել ալյումինե կնիքով՝ լույսի ազդեցությունից խուսափելու համար, և պահվել են սենյակային ջերմաստիճանում ամբողջ գիշեր: Հաջորդ առավոտյան ռեակցիայի լուծույթը պատրաստվեց՝ օգտագործելով 2 մգ/մլ քեմիլյումինեսցենտային զոնդ L-012 (Wako, կատալոգ # 120-04891), 2 մգ/մլ ձիու պերօքսիդազ (տիպ VI-A, Sigma-Aldrich, կատալոգ # P6782) և 100 մգ/մլ քիտին կամ 2 մկՄ Flg22: Այս ռեակցիայի լուծույթի 50 մկլ ավելացվեց չորս հորերից երեքին: Չորրորդ հորը փորձնական վերահսկողություն էր, որին ավելացվեց MAMP-ից զերծ ռեակցիայի լուծույթ: Յուրաքանչյուր ափսեի մեջ ներառված էին նաև չորս դատարկ հորեր, որոնք պարունակում էին միայն ջուր:
Ռեակցիայի լուծույթը ավելացնելուց հետո, լյումինեսցենցիան չափվել է SynergyTM 2 բազմադետեկտորային միկրոթիթեղի ընթերցիչով (BioTek)՝ յուրաքանչյուր 2 րոպեն մեկ, 1 ժամվա ընթացքում: Թիթեղի ընթերցիչը լյումինեսցենցիայի չափումներ է կատարում յուրաքանչյուր 2 րոպեն մեկ այս 1 ժամվա ընթացքում: Բոլոր 31 ցուցմունքների գումարը հաշվարկվել է՝ յուրաքանչյուր փոսիկի համար արժեքը ստանալու համար: Յուրաքանչյուր գենոտիպի համար MAMP արձագանքի գնահատված արժեքը հաշվարկվել է որպես (երեք փորձարարական փոսիկների միջին լյումինեսցենցիայի արժեքը՝ փորձարարական փոսիկի արժեքը) - հանած միջին դատարկ փոսիկի արժեքը: Դատարկ փոսիկների արժեքները մշտապես մոտ էին զրոյի:
Տերևի սկավառակներՆիկոտիանա բենթամիանա, որակի վերահսկման նպատակներով յուրաքանչյուր 96-խոռոչանոց ափսեի մեջ որպես վերահսկիչ խմբեր ներառվել են նաև մեկ բարձր արձագանքողականությամբ սորգոյի գիծ (SC0003) և մեկ ցածր արձագանքողականությամբ սորգոյի գիծ (PI 6069):
Բ. կուկեիպատվաստանյութի պատրաստում և պատվաստում
Բ. կուկեիԻնոկուլումը պատրաստվել է նախկինում նկարագրվածի պես։ Հակիրճ ասած, սորգոյի հատիկները երեք օր թրջվել են ջրի մեջ, լվացվել, լցվել 1 լիտրանոց կոնաձև սրվակների մեջ և մեկ ժամ ավտոկլավացվել 15 psi ջերմաստիճանում և 121°C ջերմաստիճանում։ Այնուհետև հատիկները ինոկուլացվել են մոտ 5 մլ թրջված միցելիումով, որը վերցված է թարմ մշակույթից։Բ. կուկեիLSLP18 մեկուսացված նմուշները և թողնվել են 2 շաբաթ սենյակային ջերմաստիճանում՝ յուրաքանչյուր 3 օրը մեկ թափահարելով սրվակները։ 2 շաբաթ անց սնկով վարակված սորգոյի հատիկները չորացվել են օդում, ապա պահվել 4°C ջերմաստիճանում մինչև դաշտային պատվաստումը։ Նույն պատվաստանյութն օգտագործվել է ամբողջ փորձարկման համար և ամեն տարի թարմացվել է։ Պատվաստման համար 6-10 վարակված հատիկներ տեղադրվել են 4-5 շաբաթական սորգոյի բույսերի պարույրի մեջ։ Այս սնկերից առաջացած սպորները մեկ շաբաթվա ընթացքում վարակ են առաջացրել երիտասարդ սորգոյի բույսերում։
Սերմերի պատրաստում
Դաշտում տնկելուց առաջ սորգոյի սերմերը մշակվել են ֆունգիցիդով, միջատասպանով և պաշտպանիչ խառնուրդով, որը պարունակում էր մոտ 1% Spirato 480 FS ֆունգիցիդ, 4% Sebring 480 FS ֆունգիցիդ, 3% Sorpro 940 ES սերմերի պաշտպանիչ։ Այնուհետև սերմերը 3 օր չորացվել են օդում, ինչը ապահովել է այս խառնուրդի բարակ շերտ սերմերի շուրջ։ Պաշտպանիչը թույլ է տվել օգտագործել Dual Magnum մոլախոտերի դեմ պայքարը որպես նախաբողբոջման միջոց։
Թիրախային տերևային բծերի դիմադրության գնահատում
SCP-ն տնկվել է Քլեյթոնի (Հյուսիսային Կարոլինա) Կենտրոնական մշակաբույսերի հետազոտական կայանում՝ 2017 թվականի հունիսի 14-15-ը և 2018 թվականի հունիսի 20-ը՝ պատահականացված ամբողջական բլոկային դիզայնով՝ յուրաքանչյուր դեպքում երկու փորձարարական կրկնությամբ: Փորձերը տնկվել են 1.8 մ մեկ շարքով՝ 0.9 մ շարքի լայնությամբ՝ յուրաքանչյուր հողամասում օգտագործելով 10 սերմ: Յուրաքանչյուր փորձի ծայրամասում տնկվել են երկու սահմանային շարքեր՝ եզրային ազդեցությունները կանխելու համար: Փորձերը պատվաստվել են 2017 թվականի հուլիսի 20-ին և 2018 թվականի հուլիսի 20-ին, որի պահին սորգոյի բույսերը գտնվում էին աճի 3-րդ փուլում: Գնահատականները կատարվել են մեկից ինը սանդղակով, որտեղ հիվանդության նշաններ չցուցաբերող բույսերը գնահատվել են ինը միավորով, իսկ լիովին մեռած բույսերը՝ մեկ միավորով: 2017 թվականին կատարվել է երկու գնահատական, իսկ 2018 թվականին՝ չորս չափում՝ սկսած ամեն տարի պատվաստումից երկու շաբաթ անց: sAUDPC-ն (հիվանդության զարգացման կորի տակ գտնվող ստանդարտացված տարածքը) հաշվարկվել է նախկինում նկարագրվածի պես:
Հրապարակման ժամանակը. Ապրիլ-01-2021