Ֆունգիցիդային հավելումները նվազեցնում են միայնակ որմնադիր մեղուների զուտ էներգիայի ստացումը և միկրոբիոմի բազմազանությունը։

Շնորհակալություն Nature.com կայք այցելելու համար: Ձեր օգտագործած դիտարկիչի տարբերակն ունի CSS-ի սահմանափակ աջակցություն: Լավագույն արդյունքի հասնելու համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել ձեր դիտարկիչի ավելի նոր տարբերակ (կամ անջատել համատեղելիության ռեժիմը Internet Explorer-ում): Մինչ այդ, շարունակական աջակցությունն ապահովելու համար, մենք կայքը ցուցադրում ենք առանց ոճավորման կամ JavaScript-ի:
Սնկասպանները հաճախ օգտագործվում են ծառերի պտղի ծաղկման ժամանակ և կարող են սպառնալ միջատների փոշոտողներին: Այնուամենայնիվ, քիչ բան է հայտնի այն մասին, թե ինչպես են մեղու չհանդիսացող փոշոտողները (օրինակ՝ միայնակ մեղուները, Osmia cornifrons) արձագանքում ծաղկման ընթացքում խնձորների վրա սովորաբար օգտագործվող կոնտակտային և համակարգային ֆունգիցիդներին: Այս գիտելիքների բացը սահմանափակում է ֆունգիցիդների անվտանգ կոնցենտրացիաները և ցողման ժամկետները որոշող կարգավորող որոշումները: Մենք գնահատել ենք երկու կոնտակտային ֆունգիցիդների (կապտան և մանկոզեբ) և չորս միջշերտային/ֆիտոհամակարգային ֆունգիցիդների (ցիպրոցիկլին, միկլոբուտանիլ, պիրոստրոբին և տրիֆլոքսիստրոբին) ազդեցությունը: Ազդեցությունը թրթուրների քաշի ավելացման, գոյատևման, սեռերի հարաբերակցության և մանրէների բազմազանության վրա: Գնահատումը կատարվել է քրոնիկ բանավոր կենսափորձարկման միջոցով, որի ընթացքում ծաղկափոշին մշակվել է երեք դեղաչափով՝ հիմնվելով դաշտային օգտագործման համար ներկայումս խորհուրդ տրվող դեղաչափի (1X), կես դեղաչափի (0.5X) և ցածր դեղաչափի (0.1X) վրա: Մանկոզեբի և պիրիտիզոլինի բոլոր դեղաչափերը զգալիորեն նվազեցրել են մարմնի քաշը և թրթուրների գոյատևումը: Այնուհետև մենք հաջորդականացրել ենք 16S գենը՝ մանկոզեբի թրթուրային բակտերիոմը բնութագրելու համար, որը ֆունգիցիդ է, որը պատասխանատու է ամենաբարձր մահացության համար: Մենք պարզեցինք, որ մանրէների բազմազանությունն ու առատությունը զգալիորեն նվազել են մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշով սնվող թրթուրների մոտ: Մեր լաբորատոր արդյունքները ցույց են տալիս, որ այս ֆունգիցիդներից մի քանիսը ծաղկման ընթացքում ցողելը հատկապես վնասակար է O. cornifrons-ի առողջության համար: Այս տեղեկատվությունը կարևոր է պտղատու ծառերի պաշտպանության միջոցների կայուն օգտագործման վերաբերյալ ապագա կառավարման որոշումների համար և ծառայում է որպես հիմք փոշոտողներին պաշտպանելուն ուղղված կարգավորիչ գործընթացների համար:
Միայնակ մասոն մեղուն՝ Osmia cornifrons (Hymenoptera: Megachilidae), Միացյալ Նահանգներ է ներմուծվել Ճապոնիայից 1970-ականների վերջին և 1980-ականների սկզբին, և այդ ժամանակվանից ի վեր այս տեսակը կարևոր փոշոտողի դեր է խաղացել կառավարվող էկոհամակարգերում: Այս մեղվի բնականացված պոպուլյացիաները մոտավորապես 50 տեսակի վայրի մեղուների մաս են կազմում, որոնք լրացնում են Միացյալ Նահանգներում նշի և խնձորի այգիները փոշոտող մեղուներին2,3: Մասոն մեղուները բախվում են բազմաթիվ մարտահրավերների, այդ թվում՝ բնակավայրի մասնատմանը, հարուցիչներին և թունաքիմիկատներին3,4: Միջատասպաններից ֆունգիցիդները նվազեցնում են էներգիայի ստացումը, կերակրումը5 և մարմնի վիճակը6,7: Չնայած վերջին հետազոտությունները ցույց են տալիս, որ մասոն մեղուների առողջությունը անմիջականորեն ազդվում է կոմենսալ և էկտոբակտային միկրոօրգանիզմներից8,9, քանի որ մանրէներն ու սնկերը կարող են ազդել սննդի և իմունային պատասխանների վրա, ֆունգիցիդների ազդեցության ազդեցությունը մասոն մեղուների միկրոբային բազմազանության վրա նոր է սկսում ուսումնասիրվել:
Տարբեր ազդեցություն ունեցող ֆունգիցիդներ (կոնտակտային և համակարգային) ցողվում են այգիներում ծաղկումից առաջ և ընթացքում՝ այնպիսի հիվանդությունների բուժման համար, ինչպիսիք են խնձորի կեղևը, դառը փտումը, շագանակագույն փտումը և փոշոտ բորբոսը10,11: Ֆունգիցիդները համարվում են անվնաս փոշոտողների համար, ուստի դրանք խորհուրդ են տրվում այգեգործներին ծաղկման շրջանում. այս ֆունգիցիդների ազդեցությունը և դրանց ընդունումը մեղուների կողմից համեմատաբար լավ հայտնի է, քանի որ դա ԱՄՆ-ի շրջակա միջավայրի պաշտպանության գործակալության և շատ այլ ազգային կարգավորող մարմինների կողմից թունաքիմիկատների գրանցման գործընթացի մի մասն է12,13,14: Այնուամենայնիվ, ֆունգիցիդների ազդեցությունը ոչ մեղուների վրա պակաս հայտնի է, քանի որ դրանք պարտադիր չեն Միացյալ Նահանգներում շուկայավարման թույլտվության համաձայնագրերով15: Բացի այդ, ընդհանուր առմամբ չկան ստանդարտացված արձանագրություններ միայնակ մեղուների փորձարկման համար16,17, և փորձարկման համար մեղուներ տրամադրող գաղութների պահպանումը մարտահրավեր է18: Եվրոպայում և ԱՄՆ-ում ավելի ու ավելի հաճախ են անցկացվում տարբեր կառավարվող մեղուների փորձարկումներ՝ վայրի մեղուների վրա թունաքիմիկատների ազդեցությունը ուսումնասիրելու համար, և վերջերս մշակվել են ստանդարտացված արձանագրություններ O. cornifrons-ի համար19:
Եղջյուրավոր մեղուները մոնոցիտներ են և առևտրային նպատակներով օգտագործվում են կարպի մշակաբույսերում՝ որպես մեղրատու մեղուների լրացում կամ փոխարինող: Այս մեղուները դուրս են գալիս մարտից ապրիլ ամիսներին, իսկ վաղահաս արուները դուրս են գալիս էգերից երեք-չորս օր առաջ: Զուգավորումից հետո էգը ակտիվորեն հավաքում է ծաղկափոշի և նեկտար՝ խողովակաձև բնի խոռոչում (բնական կամ արհեստական) մի շարք սերմնաբջիջներ ապահովելու համար1,20: Ձվերը դրվում են բջիջների ներսում գտնվող ծաղկափոշու վրա. այնուհետև էգը կավե պատ է կառուցում, նախքան հաջորդ բջիջը պատրաստելը: Առաջին փուլի թրթուրները փակվում են խորիոնի մեջ և սնվում են սաղմնային հեղուկներով: Երկրորդից մինչև հինգերորդ փուլը (նախափուպա) թրթուրները սնվում են ծաղկափոշով22: Երբ ծաղկափոշու պաշարները լիովին սպառվում են, թրթուրները ձևավորում են բոժոժներ, բոմբում և դուրս են գալիս որպես չափահասներ նույն սերմնաբուծարանում, սովորաբար ամռան վերջին20,23: Մեծահասակները դուրս են գալիս հաջորդ գարնանը: Մեծահասակների գոյատևումը կապված է սննդի ընդունման վրա հիմնված զուտ էներգիայի ավելացման (քաշի ավելացման) հետ: Այսպիսով, ծաղկափոշու սննդային որակը, ինչպես նաև այլ գործոններ, ինչպիսիք են եղանակը կամ թունաքիմիկատների ազդեցությունը, գոյատևման և առողջության որոշիչներն են24:
Ծաղկումից առաջ կիրառվող միջատասպաններն ու ֆունգիցիդները կարող են տարբեր աստիճաններով շարժվել բույսի անոթային համակարգում՝ տրանսլամինարից (օրինակ՝ կարող են շարժվել տերևների վերին մակերևույթից ստորին մակերես, ինչպես որոշ ֆունգիցիդներ)25 մինչև իսկապես համակարգային ազդեցություններ։ , որոնք կարող են թափանցել արմատներից պսակը, կարող են մտնել խնձորի ծաղիկների նեկտարի26 մեջ, որտեղ կարող են սպանել չափահաս O. cornifrons27-ին։ Որոշ թունաքիմիկատներ նաև ներթափանցում են ծաղկափոշու մեջ՝ ազդելով եգիպտացորենի թրթուրների զարգացման վրա և առաջացնելով դրանց մահ19։ Այլ ուսումնասիրություններ ցույց են տվել, որ որոշ ֆունգիցիդներ կարող են զգալիորեն փոխել O. lignaria-ի հետ կապված տեսակների բնադրման վարքագիծը28։ Բացի այդ, թունաքիմիկատների ազդեցության սցենարները մոդելավորող լաբորատոր և դաշտային ուսումնասիրությունները (ներառյալ ֆունգիցիդները) ցույց են տվել, որ թունաքիմիկատները բացասաբար են ազդում մեղրամեղուների և որոշ միայնակ մեղուների ֆիզիոլոգիայի22 ձևաբանության29 և գոյատևման վրա։ Ծաղկման ընթացքում անմիջապես բաց ծաղիկներին կիրառվող տարբեր ֆունգիցիդային ցողիչները կարող են աղտոտել թրթուրների զարգացման համար չափահասների կողմից հավաքված ծաղկափոշին, որի հետևանքները դեռևս ուսումնասիրման կարիք ունեն30։
Ավելի ու ավելի է ճանաչվում, որ թրթուրների զարգացումը կախված է ծաղկափոշուց և մարսողական համակարգի մանրէային համայնքներից: Մեղվի միկրոբիոմը ազդում է այնպիսի պարամետրերի վրա, ինչպիսիք են մարմնի զանգվածը31, նյութափոխանակության փոփոխությունները22 և պաթոգենների նկատմամբ զգայունությունը32: Նախորդ ուսումնասիրությունները ուսումնասիրել են զարգացման փուլի, սննդանյութերի և միջավայրի ազդեցությունը միայնակ մեղուների միկրոբիոմի վրա: Այս ուսումնասիրությունները բացահայտել են թրթուրների և ծաղկափոշու միկրոբիոմների կառուցվածքի և առատության33, ինչպես նաև Pseudomonas և Delftia ամենատարածված բակտերիալ սեռերի նմանություններ միայնակ մեղուների տեսակների շրջանում: Այնուամենայնիվ, չնայած ֆունգիցիդները կապված են մեղուների առողջությունը պաշտպանելու ռազմավարությունների հետ, ֆունգիցիդների ազդեցությունը թրթուրների միկրոբիոտայի վրա՝ բերանի խոռոչի ուղղակի ազդեցության միջոցով, մնում է չուսումնասիրված:
Այս ուսումնասիրությունը ստուգել է Միացյալ Նահանգներում ծառերի պտղի վրա օգտագործման համար գրանցված վեց լայնորեն օգտագործվող ֆունգիցիդների իրական դեղաչափերի ազդեցությունը, ներառյալ կոնտակտային և համակարգային ֆունգիցիդները, որոնք բանավոր կերպով ընդունվում են եգիպտացորենի եղջյուրավոր որդերի թրթուրներին՝ աղտոտված սննդից: Մենք պարզեցինք, որ կոնտակտային և համակարգային ֆունգիցիդները նվազեցնում են մեղվի մարմնի քաշի ավելացումը և մեծացնում մահացությունը, որոնցից ամենալուրջ ազդեցությունները կապված են մանկոզեբի և պիրիթիոպիդի հետ: Այնուհետև մենք համեմատեցինք մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշու սննդակարգով սնվող թրթուրների միկրոբային բազմազանությունը վերահսկիչ սննդակարգով սնվողների հետ: Մենք քննարկում ենք մահացության հիմքում ընկած հնարավոր մեխանիզմները և վնասատուների և փոշոտողների ինտեգրված կառավարման (IPPM)36 ծրագրերի հետևանքները:
Բոժոժներում ձմեռող չափահաս O. cornifrons բոժոժները ձեռք են բերվել Բիգլերվիլի (Փենսիլվանիա) Մրգերի հետազոտությունների կենտրոնից և պահվել են -3-ից 2°C (±0.3°C) ջերմաստիճանում: Փորձից առաջ (ընդհանուր առմամբ 600 բոժոժ): 2022 թվականի մայիսին 100 O. cornifrons բոժոժներ ամեն օր տեղափոխվել են պլաստիկ բաժակների մեջ (50 բոժոժ մեկ բաժակի համար, DI 5 սմ × 15 սմ երկարությամբ) և բաժակների մեջ տեղադրվել են անձեռոցիկներ՝ բացումը խթանելու և ծամելի հիմք ապահովելու համար, նվազեցնելով քարքարոտ մեղուների վրա սթրեսը37: Բոժոժներով երկու պլաստիկ բաժակները տեղադրեք միջատների վանդակում (30 × 30 × 30 սմ, BugDorm MegaView Science Co. Ltd., Թայվան)՝ 10 մլ կերակրիչներով, որոնք պարունակում են 50% սախարոզի լուծույթ, և պահեք չորս օր՝ փակումը և զուգավորումն ապահովելու համար: 23°C, հարաբերական խոնավություն 60%, լուսապաշարժություն 10 լ (ցածր ինտենսիվություն). 14 օր: Վեց օր շարունակ (օրական 100-ական) ամեն առավոտ բաց էին թողնում 100 զուգավորված էգեր և արուներ՝ խնձորի ծաղկման գագաթնակետին երկու արհեստական ​​բների մեջ (բույնի թակարդ՝ լայնություն՝ 33.66 × բարձրություն՝ 30.48 × երկարություն՝ 46.99 սմ; լրացուցիչ նկար 1): Տեղադրվել են Փենսիլվանիայի նահանգային արբորետում, բալենու (Prunus cerasus 'Eubank' Sweet Cherry Pie™), դեղձենու (Prunus persica 'Contender'), Prunus persica 'PF 27A' Flamin Fury®), տանձենու (Pyrus perifolia 'Olympic', Pyrus perifolia 'Shinko', Pyrus perifolia 'Shinseiki'), կորոնարիա խնձորենու (Malus coronaria) և խնձորենու բազմաթիվ տեսակների (Malus coronaria, Malus), ընտանի խնձորենու (Co-op 30′ Enterprise™), Malus խնձորենու (Co-Op 31′ Winecrisp™), բեգոնիա (Freedom), բեգոնիա (Bedroom), բեգոնիա (Golden Delicious), բեգոնիա (Nova Spy) մոտ: Յուրաքանչյուր կապույտ պլաստիկե թռչնանոց տեղավորվում է երկու փայտե տուփերի վրա: Յուրաքանչյուր բնի տուփ պարունակում էր 800 դատարկ կրաֆտ թղթե խողովակներ (բաց պարուրաձև, 0.8 սմ ներքին տրամագիծ × 15 սմ երկարություն) (Jonesville Paper Tube Co., Միչիգան), որոնք տեղադրված էին անթափանց ցելոֆանե խողովակների մեջ (0.7 արտաքին տրամագիծ, տե՛ս պլաստիկե խցանները (T-1X խցաններ) ապահովում են բնադրման տեղ:
Երկու բնատուփերն էլ ուղղված էին դեպի արևելք և ծածկված էին կանաչ պլաստիկ այգու ցանկապատով (Everbilt մոդել #889250EB12, բացվածքի չափսը՝ 5 × 5 սմ, 0.95 մ × 100 մ)՝ կրծողների և թռչունների մուտքը կանխելու համար, և տեղադրվում էին հողի մակերեսին՝ բնատուփի հողատուփերի կողքին: Բնատուփ (Լրացուցիչ նկար 1ա): Եգիպտացորենի խրձի ձվերը հավաքվում էին ամեն օր՝ բներից հավաքելով 30 խողովակ և դրանք լաբորատորիա տեղափոխելով: Մկրատով կտրվածք արեք խողովակի ծայրին, այնուհետև ապամոնտաժեք պարուրաձև խողովակը՝ ձվաբջիջները բացահայտելու համար: Առանձին ձվերը և դրանց ծաղկափոշին հեռացվեցին կոր սպաթուլայի միջոցով (Microslide գործիքակազմ, BioQuip Products Inc., Կալիֆոռնիա): Ձվերը ինկուբացվեցին խոնավ ֆիլտրի թղթի վրա և 2 ժամ տեղադրվեցին Պետրիի ամանի մեջ՝ նախքան մեր փորձերում օգտագործելը (Լրացուցիչ նկար 1բ-դ):
Լաբորատորիայում մենք գնահատել ենք խնձորենու ծաղկումից առաջ և ընթացքում կիրառված վեց ֆունգիցիդների բերանային թունավորությունը երեք կոնցենտրացիաներով (0.1X, 0.5X և 1X, որտեղ 1X-ը 100 գալոն ջրի/ակրի համար կիրառված նշագիծն է: Բարձր դաշտային դոզան = դաշտում կոնցենտրացիան): , աղյուսակ 1): Յուրաքանչյուր կոնցենտրացիա կրկնվել է 16 անգամ (n = 16): Երկու կոնտակտային ֆունգիցիդներ (աղյուսակ S1՝ մանկոզեբ 2696.14 ppm և կապտան 2875.88 ppm) և չորս համակարգային ֆունգիցիդներ (աղյուսակ S1՝ պիրիթիոստրոբին 250.14 ppm; տրիֆլօքսիստրոբին 110.06 ppm; միկլոբուտանիլ ազոլ 75 0.12 ppm; ցիպրոդինիլ 280.845 ppm) թունավորությունը մրգերի, բանջարեղենի և դեկորատիվ մշակաբույսերի համար: Մենք ծաղկափոշին հոմոգենացրեցինք աղացիչի միջոցով, 0.20 գ տեղափոխեցինք ջրհորի մեջ (24 ջրհորով Falcon Plate) և ավելացրինք ու խառնեցինք 1 մկլ ֆունգիցիդային լուծույթ՝ 1 մմ խորությամբ ջրհորներով բուրգաձև ծաղկափոշի ստանալու համար, որոնց մեջ տեղադրվեցին ձվերը: Տեղադրեք փոքրիկ սպաթուլայի միջոցով (Լրացուցիչ նկար 1c,d): Falcon ափսեները պահվեցին սենյակային ջերմաստիճանում (25°C) և 70% հարաբերական խոնավության պայմաններում: Մենք համեմատեցինք դրանք վերահսկիչ թրթուրների հետ, որոնք սնվում էին մաքուր ջրով մշակված միատարր ծաղկափոշու սննդով: Մենք գրանցեցինք մահացությունը և չափեցինք թրթուրների քաշը ամեն երկրորդ օրը, մինչև թրթուրները հասան նախաբուծական տարիքի՝ օգտագործելով վերլուծական կշեռք (Fisher Scientific, ճշգրտություն = 0.0001 գ): Վերջապես, սեռերի հարաբերակցությունը գնահատվեց՝ 2.5 ամիս անց բոժոժը բացելով:
ԴՆԹ-ն արդյունահանվել է O. cornifrons-ի ամբողջական թրթուրներից (n = 3՝ յուրաքանչյուր բուժման պայմանի համար, մանկոզեբով մշակված և չմշակված ծաղկափոշի), և մենք այս նմուշների վրա կատարել ենք մանրէային բազմազանության վերլուծություններ, հատկապես այն պատճառով, որ մանկոզեբում ամենաբարձր մահացությունը դիտվել է MnZn ստացող թրթուրների մոտ: ԴՆԹ-ն ուժեղացվել է, մաքրվել է DNAZymoBIOMICS®-96 MagBead DNA հավաքածուի միջոցով (Zymo Research, Իրվայն, Կալիֆոռնիա) և հաջորդականացվել (600 ցիկլ) Illumina® MiSeq™-ի վրա՝ v3 հավաքածուի միջոցով: Բակտերիալ 16S ռիբոսոմային ՌՆԹ գեների թիրախային հաջորդականացումը կատարվել է Quick-16S™ NGS Library Prep Kit-ի միջոցով (Zymo Research, Իրվայն, Կալիֆոռնիա)՝ օգտագործելով 16S rRNA գենի V3-V4 շրջանը թիրախավորող պրայմերներ: Բացի այդ, 18S հաջորդականացումը կատարվել է 10% PhiX ներառում օգտագործելով, իսկ ուժեղացումը՝ 18S001 և NS4 պրայմեր զույգի միջոցով:
Զույգացված ընթերցումները ներմուծել և մշակել39՝ օգտագործելով QIIME2 խողովակաշարը (v2022.11.1): Այս ընթերցումները կտրվել և միավորվել են, իսկ քիմերային հաջորդականությունները հեռացվել են QIIME2-ում DADA2 հավելվածի միջոցով (qiime dada2 աղմուկի զույգավորում)40: 16S և 18S դասերի նշանակումները կատարվել են օբյեկտների դասակարգչի Classify-sklearn հավելվածի և նախապես պատրաստված silva-138-99-nb-classifier արտեֆակտի միջոցով:
Բոլոր փորձարարական տվյալները ստուգվել են նորմալության (Շապիրո-Վիլքս) և դիսպերսիաների միատարրության (Լևենի թեստ) համար։ Քանի որ տվյալների հավաքածուն չէր համապատասխանում պարամետրիկ վերլուծության ենթադրություններին, և փոխակերպումը չկարողացավ ստանդարտացնել մնացորդները, մենք կատարեցինք ոչ պարամետրիկ երկկողմանի ANOVA (Կրուսկալ-Վալիս) երկու գործոնով [ժամանակ (եռաֆազ 2, 5 և 8 օրվա ժամանակային կետեր) և ֆունգիցիդ]՝ թրթուրների թարմ քաշի վրա մշակման ազդեցությունը գնահատելու համար, այնուհետև Վիլկոքսոնի թեստի միջոցով կատարվեցին հետհոկ ոչ պարամետրիկ զույգային համեմատություններ։ Մենք օգտագործեցինք ընդհանրացված գծային մոդել (GLM)՝ Պուասոնի բաշխմամբ՝ ֆունգիցիդների ազդեցությունը գոյատևման վրա երեք ֆունգիցիդների կոնցենտրացիաների դեպքում համեմատելու համար41,42։ Դիֆերենցիալ առատության վերլուծության համար ամպլիկոնային հաջորդականության տարբերակների (ASV) քանակը խմբավորվեց սեռի մակարդակով։ Խմբերի միջև դիֆերենցիալ առատության համեմատությունները՝ օգտագործելով 16S (սեռի մակարդակ) և 18S հարաբերական առատություն, կատարվել են դիրքի, մասշտաբի և ձևի ընդհանրացված հավելումային մոդելի (GAMLSS) միջոցով՝ բետա զրոյականորեն ուռճացված (BEZI) ընտանեկան բաշխումներով, որոնք մոդելավորվել են մակրոյի վրա՝ Microbiome R43-ում (v1.1): 1). Հեռացնել միտոքոնդրիալ և քլորոպլաստային տեսակները դիֆերենցիալ վերլուծությունից առաջ: 18S-ի տարբեր տաքսոնոմիկ մակարդակների պատճառով, դիֆերենցիալ վերլուծությունների համար օգտագործվել է յուրաքանչյուր տաքսոնի միայն ամենացածր մակարդակը: Բոլոր վիճակագրական վերլուծությունները կատարվել են R-ի միջոցով (v. 3.4.3., CRAN նախագիծ) (Team 2013):
Մանկոզեբի, պիրիթիոստրոբինի և տրիֆլօքսիստրոբինի ազդեցությունը զգալիորեն նվազեցրեց մարմնի քաշի ավելացումը O. cornifrons-ի մոտ (Նկար 1): Այս ազդեցությունները հետևողականորեն դիտարկվել են բոլոր երեք գնահատված դեղաչափերի համար (Նկար 1a–c): Ցիկլոստրոբինը և միկլոբուտանիլը զգալիորեն չեն նվազեցրել թրթուրների քաշը:
Ցողունային բորբոսի թրթուրների միջին թարմ քաշը չափվել է երեք ժամանակային կետերում՝ չորս սննդային մշակումների դեպքում (միատարր ծաղկափոշու սնուցում + ֆունգիցիդ՝ վերահսկիչ, 0.1X, 0.5X և 1X դեղաչափեր): (ա) Ցածր դեղաչափ (0.1X). ​​առաջին անգամային կետ (1-ին օր). χ2: 30.99, DF = 6; P < 0.0001, երկրորդ անգամային կետ (5-րդ օր). 22.83, DF = 0.0009; երրորդ անգամային կետ (8-րդ օր). χ2: 28.39, DF = 6; (բ) կես դեղաչափ (0.5X). առաջին անգամային կետ (1-ին օր). χ2: 35.67, DF = 6; P < 0.0001, երկրորդ անգամային կետ (առաջին օր).): χ2: 15.98, DF = 6; P = 0.0090; երրորդ ժամանակային կետ (8-րդ օր) χ2: 16.47, DF = 6; (գ) Տեղամաս կամ լրիվ դոզա (1X): առաջին ժամանակային կետ (1-ին օր) χ2: 20.64, P = 6; P = 0.0326, երկրորդ ժամանակային կետ (5-րդ օր): χ2: 22.83, DF = 6; P = 0.0009; երրորդ ժամանակային կետ (8-րդ օր): χ2: 28.39, DF = 6; դիսպերսիայի ոչ պարամետրիկ վերլուծություն: Սյուները ներկայացնում են զույգային համեմատությունների միջին ± SE (α = 0.05) (n = 16) *P ≤ 0.05, **P ≤ 0.001, ***P ≤ 0.0001:
Ամենացածր դեղաչափի (0.1X) դեպքում թրթուրի մարմնի քաշը նվազել է 60%-ով՝ տրիֆլօքսիստրոբինի դեպքում, 49%-ով՝ մանկոզեբով, 48%-ով՝ միկլոբուտանիլով և 46%-ով՝ պիրիթիստրոբինով (Նկար 1ա): Դաշտային դեղաչափի կեսին (0.5X) ենթարկվելիս մանկոզեբի թրթուրի մարմնի քաշը նվազել է 86%-ով, պիրիթիոստրոբինին՝ 52%-ով, իսկ տրիֆլօքսիստրոբինին՝ 50%-ով (Նկար 1բ): Մանկոզեբի լրիվ դաշտային դեղաչափը (1X) նվազեցրել է թրթուրի քաշը 82%-ով, պիրիթիոստրոբինին՝ 70%-ով, իսկ տրիֆլօքսիստրոբինին, միկլոբուտանիլին և սանգարդին՝ մոտավորապես 30%-ով (Նկար 1գ):
Մահացությունն ամենաբարձրն էր մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշով սնված թրթուրների մոտ, որին հաջորդում էին պիրիթիոստրոբինը և տրիֆլոքսիստրոբինը: Մահացությունն աճել է մանկոզեբի և պիրիտիսոլինի դեղաչափերի ավելացմանը զուգընթաց (Նկար 2, աղյուսակ 2): Այնուամենայնիվ, եգիպտացորենի բորբոսի մահացությունը միայն աննշանորեն աճել է տրիֆլոքսիստրոբինի կոնցենտրացիաների աճին զուգընթաց. ցիպրոդինիլը և կապտանը զգալիորեն չեն մեծացրել մահացությունը՝ համեմատած վերահսկիչ բուժումների հետ:
Վեց տարբեր ֆունգիցիդներով անհատապես մշակված ծաղկափոշու ընդունումից հետո համեմատվել է բորբոսաճանճի թրթուրների մահացությունը: Մանկոզեբը և պենտոպիրամիդը ավելի զգայուն էին եգիպտացորենի թրթուրների բերանային ազդեցության նկատմամբ (GLM: χ = 29.45, DF = 20, P = 0.0059) (գծի թեքություն = 0.29, P < 0.001; թեքություն = 0.24, P < 0.00)):
Միջին հաշվով, բոլոր բուժումներից հիվանդների 39.05%-ը կին էին, իսկ 60.95%-ը՝ տղամարդիկ: Վերահսկիչ բուժումների շրջանում կանանց համամասնությունը կազմել է 40%՝ թե՛ ցածր դեղաչափով (0.1X), թե՛ կես դեղաչափով (0.5X) ուսումնասիրություններում, և 30%՝ դաշտային դեղաչափով (1X) ուսումնասիրություններում: 0.1X դեղաչափով մանկոզեբով և միկլոբուտանիլով բուժված ծաղկափոշով սնված թրթուրների շրջանում չափահաս թրթուրների 33.33%-ը իգական սեռի էին, չափահաս թրթուրների 22%-ը՝ իգական սեռի, չափահաս թրթուրների 44%-ը՝ իգական սեռի, չափահաս թրթուրների 44%-ը՝ իգական սեռի, չափահաս թրթուրների 41%-ը՝ իգական սեռի, իսկ վերահսկիչ խումբը՝ 31% (Նկար 3ա): Դեղաչափի 0.5 անգամ մեծացման դեպքում մանկոզեբի և պիրիթիոստրոբինի խմբում չափահաս որդերի 33%-ը էգ էին, տրիֆլոքսիստրոբինի խմբում՝ 36%-ը, միկլոբուտանիլ խմբում՝ 41%-ը և ցիպրոստրոբինի խմբում՝ 46%-ը: Կապտանի խմբում այս ցուցանիշը կազմել է 53%, իսկ վերահսկիչ խմբում՝ 38% (Նկար 3բ): 1X դեղաչափի դեպքում մանկոզեբի խմբի 30%-ը կանայք էին, պիրիթիոստրոբինի խմբի 36%-ը, տրիֆլոքսիստրոբինի խմբի 44%-ը, միկլոբուտանիլ խմբի 38%-ը, վերահսկիչ խմբի 50%-ը՝ կանայք՝ 38.5% (Նկար 3գ):
Էգ և արու բորբոսիկների տոկոսը թրթուրային փուլում գտնվող ֆունգիցիդով վարակվելուց հետո։ (ա) Ցածր դոզա (0.1X)։ (բ) Կես դոզա (0.5X)։ (գ) Դաշտային դոզա կամ լրիվ դոզա (1X)։
16S հաջորդականության վերլուծությունը ցույց տվեց, որ մանրէային խումբը տարբերվում էր մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշիով սնվող և չմշակված ծաղկափոշիով սնվող թրթուրների միջև (Նկար 4ա): Ծաղկափոշիով սնվող չմշակված թրթուրների մանրէային ինդեքսն ավելի բարձր էր, քան մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշիով սնվող թրթուրներինը (Նկար 4բ): Չնայած խմբերի միջև հարստության դիտարկված տարբերությունը վիճակագրորեն նշանակալի չէր, այն զգալիորեն ցածր էր, քան չմշակված ծաղկափոշիով սնվող թրթուրների մոտ դիտարկվածը (Նկար 4գ): Հարաբերական առատությունը ցույց տվեց, որ վերահսկիչ ծաղկափոշիով սնվող թրթուրների միկրոբիոտան ավելի բազմազան էր, քան մանկոզեբով մշակված թրթուրներով սնվող թրթուրներինը (Նկար 5ա): Նկարագրական վերլուծությունը բացահայտեց 28 սեռերի առկայությունը վերահսկիչ և մանկոզեբով մշակված նմուշներում (Նկար 5բ): c 18S հաջորդականության միջոցով վերլուծությունը չի բացահայտել նշանակալի տարբերություններ (Լրացուցիչ նկար 2):
16S հաջորդականությունների վրա հիմնված SAV պրոֆիլները համեմատվել են Շենոնի հարստության և տիպային մակարդակում դիտարկված հարստության հետ։ (ա) Գլխավոր կոորդինատների վերլուծություն (PCoA)՝ հիմնված չմշակված ծաղկափոշով կերակրված կամ վերահսկիչ (կապույտ) և մանկոզեբով կերակրված թրթուրների (նարնջագույն) ընդհանուր մանրէային համայնքի կառուցվածքի վրա։ Յուրաքանչյուր տվյալների կետ ներկայացնում է առանձին նմուշ։ PCoA-ն հաշվարկվել է բազմաչափ t բաշխման Բրեյ-Կուրտիսի հեռավորության միջոցով։ Օվալները ներկայացնում են 80% վստահության մակարդակը։ (բ) Տուփ-գծապատկեր, Շենոնի հարստության հում տվյալներ (կետեր) և գ. Դիտարկելի հարստություն։ Տուփ-գծապատկերները ցույց են տալիս միջնագծի, միջքառորդական տիրույթի (IQR) և 1.5 × IQR (n = 3) համար նախատեսված վանդակները։
Մանկոզեբով մշակված և չմշակված ծաղկափոշիով սնվող թրթուրների մանրէային համայնքների կազմը։ (ա) Թրթուրների մոտ մանրէային ցեղերի հարաբերական առատությունը։ (բ) Նույնականացված մանրէային համայնքների ջերմային քարտեզը։ Դելֆտիա (հավանականության հարաբերակցություն (OR) = 0.67, P = 0.0030) և Pseudomonas (OR = 0.3, P = 0.0074), Microbacterium (OR = 0.75, P = 0.0617) (OR = 1.5, P = 0.0060)։ Ջերմային քարտեզի տողերը խմբավորված են կոլեռացիոն հեռավորության և միջին կապակցվածության միջոցով։
Մեր արդյունքները ցույց են տալիս, որ ծաղկման ընթացքում լայնորեն կիրառվող կոնտակտային (մանկոզեբ) և համակարգային (պիրոստրոբին և տրիֆլոքսիստրոբին) ֆունգիցիդների բերանային ազդեցությունը զգալիորեն նվազեցրել է եգիպտացորենի թրթուրների քաշի ավելացումը և մահացության աճը: Բացի այդ, մանկոզեբը զգալիորեն նվազեցրել է միկրոբիոմի բազմազանությունն ու հարստությունը նախաբուպալ փուլում: Միկլոբուտանիլը, մեկ այլ համակարգային ֆունգիցիդ, զգալիորեն նվազեցրել է թրթուրների մարմնի քաշի ավելացումը բոլոր երեք դեղաչափերի դեպքում: Այս ազդեցությունը ակնհայտ էր երկրորդ (5-րդ օր) և երրորդ (8-րդ օր) ժամանակային կետերում: Ի տարբերություն դրա, ցիպրոդինիլը և կապտանը զգալիորեն չեն նվազեցրել քաշի ավելացումը կամ գոյատևումը վերահսկիչ խմբի համեմատ: Մեր իմացության չափով, այս աշխատանքը առաջինն է, որը որոշում է եգիպտացորենի մշակաբույսերը ուղղակի ծաղկափոշու ազդեցության միջոցով պաշտպանելու համար օգտագործվող տարբեր ֆունգիցիդների դաշտային չափաբաժինների ազդեցությունը:
Բոլոր ֆունգիցիդային բուժումները զգալիորեն նվազեցրել են մարմնի քաշի ավելացումը՝ համեմատած վերահսկիչ բուժումների հետ: Մանկոզեբն ամենամեծ ազդեցությունն է ունեցել թրթուրի մարմնի քաշի ավելացման վրա՝ միջինում 51% նվազումով, որին հաջորդել է պիրիթիոստրոբինը: Այնուամենայնիվ, այլ ուսումնասիրություններ չեն հաղորդել ֆունգիցիդների դաշտային դեղաչափերի անբարենպաստ ազդեցությունները թրթուրի փուլերի վրա44: Չնայած դիթիոկարբամատային բիոցիդները ցույց են տվել ցածր սուր թունավորություն45, էթիլեն բիսդիթիոկարբամատները (EBDCS), ինչպիսին է մանկոզեբը, կարող են քայքայվել միզանյութի էթիլեն սուլֆիդի: Հաշվի առնելով դրա մուտագեն ազդեցությունը այլ կենդանիների վրա, այս քայքայման արգասիք կարող է պատասխանատու լինել դիտարկված ազդեցությունների համար46,47: Նախորդ ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ էթիլեն թիոմիզանյութի առաջացման վրա ազդում են այնպիսի գործոններ, ինչպիսիք են բարձր ջերմաստիճանը48, խոնավության մակարդակը49 և արտադրանքի պահպանման տևողությունը50: Բիոցիդների պատշաճ պահպանման պայմանները կարող են մեղմել այս կողմնակի ազդեցությունները: Բացի այդ, Եվրոպական սննդի անվտանգության մարմինը մտահոգություն է հայտնել պիրիթիոպիդի թունավորության վերաբերյալ, որը, ինչպես ցույց է տրվել, քաղցկեղածին է այլ կենդանիների մարսողական համակարգերի համար51:
Մանկոզեբի, պիրիթիոստրոբինի և տրիֆլօքսիստրոբինի բանավոր ընդունումը մեծացնում է եգիպտացորենի բորբոսի թրթուրների մահացությունը: Ի տարբերություն դրա, միկլոբուտանիլը, ցիպրոցիկլինը և կապտանն ազդեցություն չեն ունեցել մահացության վրա: Այս արդյունքները տարբերվում են Լադուրների և այլոց արդյունքներից52, որոնք ցույց են տվել, որ կապտանն զգալիորեն նվազեցրել է չափահաս O. lignaria-ի և Apis mellifera L.-ի (Hymenoptera, Apisidae) գոյատևումը: Բացի այդ, պարզվել է, որ կապտան և բոսկալիդ նման ֆունգիցիդները առաջացնում են թրթուրների մահացություն52,53,54 կամ փոխում են սննդային վարքագիծը55: Այս փոփոխությունները, իրենց հերթին, կարող են ազդել ծաղկափոշու սննդային որակի և, ի վերջո, թրթուրային փուլի էներգիայի ավելացման վրա: Վերահսկիչ խմբում դիտարկված մահացությունը համապատասխանում էր այլ ուսումնասիրությունների արդյունքներին56,57:
Մեր աշխատանքում դիտարկված արուներին նպասխանող սեռերի հարաբերակցությունը կարող է բացատրվել այնպիսի գործոններով, ինչպիսիք են ծաղկման ընթացքում անբավարար զուգավորումը և վատ եղանակային պայմանները, ինչպես նախկինում O. cornuta-ի համար ենթադրել էին Վիչենսը և Բոշը: Չնայած մեր ուսումնասիրության մեջ էգերն ու արուները չորս օր ունեին զուգավորման համար (ժամանակահատված, որը սովորաբար բավարար է համարվում հաջող զուգավորման համար), մենք միտումնավոր նվազեցրինք լույսի ինտենսիվությունը՝ սթրեսը նվազագույնի հասցնելու համար: Այնուամենայնիվ, այս փոփոխությունը կարող է ակամա խանգարել զուգավորման գործընթացին61: Բացի այդ, մեղուները մի քանի օր ապրում են անբարենպաստ եղանակային պայմաններում, այդ թվում՝ անձրև և ցածր ջերմաստիճաններ (<5°C), որոնք նույնպես կարող են բացասաբար ազդել զուգավորման հաջողության վրա4,23:
Չնայած մեր ուսումնասիրությունը կենտրոնացած էր ամբողջ թրթուրային միկրոբիոմի վրա, մեր արդյունքները հնարավորություն են տալիս պատկերացում կազմել բակտերիալ համայնքների միջև հնարավոր փոխհարաբերությունների մասին, որոնք կարող են կարևոր լինել մեղուների սննդի և ֆունգիցիդների ազդեցության համար: Օրինակ՝ մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշով սնված թրթուրները զգալիորեն նվազեցրել են մանրէային համայնքի կառուցվածքը և առատությունը՝ համեմատած չմշակված ծաղկափոշով սնված թրթուրների հետ: Չմշակված ծաղկափոշի օգտագործող թրթուրների մոտ Proteobacteria և Actinobacteria բակտերիալ խմբերը գերիշխող էին և հիմնականում աէրոբ կամ ֆակուլտատիվ աէրոբ էին: Դելֆտ բակտերիաները, որոնք սովորաբար կապված են միայնակ մեղուների տեսակների հետ, հայտնի են իրենց հակաբիոտիկ ակտիվությամբ, ինչը վկայում է պաթոգենների դեմ պոտենցիալ պաշտպանիչ դերի մասին: Մեկ այլ բակտերիալ տեսակ՝ Pseudomonas-ը, առատ էր չմշակված ծաղկափոշով սնված թրթուրների մեջ, բայց զգալիորեն նվազեցված էր մանկոզեբով մշակված թրթուրների մեջ: Մեր արդյունքները հաստատում են նախորդ ուսումնասիրությունները, որոնք Pseudomonas-ը նույնականացրել են որպես O. bicornis35-ի և այլ միայնակ իշամեղուների34 ամենատարածված սեռերից մեկը: Չնայած որ Pseudomonas-ի O. cornifrons-ի առողջության մեջ դերի փորձարարական ապացույցները չեն ուսումնասիրվել, ցույց է տրվել, որ այս մանրէն խթանում է պաշտպանիչ տոքսինների սինթեզը Paederus fuscipes բզեզի մեջ և խթանում է արգինինի նյութափոխանակությունը in vitro 35, 65: Այս դիտարկումները ենթադրում են վիրուսային և մանրէային պաշտպանության մեջ պոտենցիալ դեր O. cornifrons թրթուրների զարգացման ընթացքում: Microbacterium-ը մեր ուսումնասիրության մեջ նույնականացված մեկ այլ ցեղ է, որը, ինչպես նշվում է, մեծ քանակությամբ առկա է սև զինվորական ճանճի թրթուրների մեջ սովի պայմաններում66: O. cornifrons թրթուրների մեջ միկրոբակտերիաները կարող են նպաստել աղիքային միկրոբիոմի հավասարակշռությանը և դիմադրողականությանը սթրեսի պայմաններում: Բացի այդ, Rhodococcus-ը հանդիպում է O. cornifrons թրթուրների մեջ և հայտնի է իր դետոքսիկացիոն ունակություններով67: Այս ցեղը հանդիպում է նաև A. florea-ի աղիքներում, բայց շատ ցածր առատությամբ68: Մեր արդյունքները ցույց են տալիս բազմաթիվ մանրէային տաքսոնների բազմաթիվ գենետիկական տատանումների առկայությունը, որոնք կարող են փոխել թրթուրների նյութափոխանակության գործընթացները: Այնուամենայնիվ, անհրաժեշտ է O. cornifrons-ի ֆունկցիոնալ բազմազանության ավելի լավ հասկացողություն:
Ամփոփելով՝ արդյունքները ցույց են տալիս, որ մանկոզեբը, պիրիթիոստրոբինը և տրիֆլօքսիստրոբինը նվազեցրել են եգիպտացորենի բորբոսի թրթուրների մարմնի քաշի ավելացումը և մահացության աճը: Չնայած ֆունգիցիդների փոշոտողների վրա ազդեցության վերաբերյալ մտահոգությունները մեծանում են, անհրաժեշտ է ավելի լավ հասկանալ այդ միացությունների մնացորդային մետաբոլիտների ազդեցությունը: Այս արդյունքները կարող են ներառվել փոշոտողների ինտեգրված կառավարման ծրագրերի առաջարկություններում, որոնք կօգնեն ֆերմերներին խուսափել որոշակի ֆունգիցիդների օգտագործումից պտղատու ծառերի ծաղկումից առաջ և ընթացքում՝ ընտրելով ֆունգիցիդներ և փոփոխելով կիրառման ժամանակը, կամ խրախուսելով պակաս վնասակար այլընտրանքների օգտագործումը: Այս տեղեկատվությունը կարևոր է թունաքիմիկատների օգտագործման վերաբերյալ առաջարկություններ մշակելու համար, ինչպիսիք են առկա ցողման ծրագրերի ճշգրտումը և ցողման ժամանակի փոփոխությունը ֆունգիցիդներ ընտրելիս կամ ավելի քիչ վտանգավոր այլընտրանքների օգտագործումը խթանելը: Անհրաժեշտ են հետագա հետազոտություններ ֆունգիցիդների սեռերի հարաբերակցության, սննդային վարքագծի, աղիքային միկրոբիոմի և եգիպտացորենի բորբոսի քաշի կորստի ու մահացության հիմքում ընկած մոլեկուլային մեխանիզմների վրա անբարենպաստ ազդեցության վերաբերյալ:
Նկարներ 1-ում և 2-ում ներկայացված 1, 2 և 3 աղբյուրների տվյալները պահվել են figshare տվյալների DOI պահոցում՝ https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996245 և https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996233: Այս ուսումնասիրության մեջ վերլուծված հաջորդականությունները (Նկարներ 4, 5) հասանելի են NCBI SRA պահոցում՝ PRJNA1023565 մուտքագրման համարով:
Բոշ, Ջ. և Քեմփ, Վ.Պ. Մեղվամեղուների տեսակների մշակումը և հաստատումը որպես գյուղատնտեսական մշակաբույսերի փոշոտողներ. Osmia ցեղի (Hymenoptera: Megachilidae) և պտղատու ծառերի օրինակը: ցուլ: Ntomore: resource. 92, 3–16 (2002):
Փարքեր, Մ.Գ. և այլք։ Նյու Յորքի և Փենսիլվանիայի խնձոր աճեցնողների շրջանում փոշոտման պրակտիկան և այլընտրանքային փոշոտողների ընկալումները։ թարմացում։ Գյուղատնտեսություն։ Պարենային համակարգեր։ 35, 1–14 (2020)։
Կոխ Ի., Լոնսդորֆ Է.Վ., Արց Դ.Ռ., Փիթս-Սինգեր Թ.Լ. և Ռիկեթս Թ.Հ. Նշի փոշոտման էկոլոգիան և տնտեսագիտությունը՝ օգտագործելով տեղական մեղուներ: J. Economics. Ntomore. 111, 16–25 (2018):
Լի, Է., Հե, Յ., և Պարկ, Յ.-Լ. Կլիմայի փոփոխության ազդեցությունը տրագոպանի ֆենոլոգիայի վրա. հետևանքները պոպուլյացիայի կառավարման համար: Climb. Change 150, 305–317 (2018):
Արտց, Դ.Ռ. և Փիթս-Սինգեր, Թ.Լ. Ֆունգիցիդների և օժանդակ միջոցների ազդեցությունը երկու միայնակ մեղուների (Osmia lignaria և Megachile rotundata) բնադրման վարքագծի վրա: PloS One 10, e0135688 (2015):
Բովե, Ս. և այլք։ Ցածր թունավորությամբ մշակաբույսերի ֆունգիցիդը (ֆենբուկոնազոլ) խանգարում է արուների վերարտադրողական որակի ազդանշաններին, ինչը հանգեցնում է վայրի միայնակ մեղուների մոտ զուգավորման հաջողության նվազմանը։ J. Apps. ecology. 59, 1596–1607 (2022)։
Սգոլաստրա Ֆ. և այլք։ Նեոնիկոտինոիդ միջատասպանները և էրգոստերոլի կենսասինթեզը ճնշում են սիներգիստական ​​ֆունգիցիդների մահացությունը մեղուների երեք տեսակների մոտ։ Վնասատուների դեմ պայքար։ Գիտություն։ 73, 1236–1243 (2017)։
Կունեման Ջ.Գ., Գիլունգ Ջ., Վան Դայք Մ.Տ., Ֆորդայս Ռ.Ֆ. և Դենֆորթ Բ.Ն. Միայնակ իշամեղվի թրթուրները փոխում են ծաղկափոշու միջոցով ցողունային բնադրող մեղուներին մատակարարվող բակտերիալ բազմազանությունը: Osmia cornifrons (Megachilidae). առջևի մաս: միկրոօրգանիզմ: 13, 1057626 (2023):
Դհարամպալ Պ.Ս., Դանֆորթ Բ.Ն. և Ստեֆան Ս.Ա. Ֆերմենտացված ծաղկափոշու մեջ առկա էկտոսիմբիոտիկ միկրոօրգանիզմները նույնքան կարևոր են միայնակ մեղուների զարգացման համար, որքան ծաղկափոշին ինքնին։ էկոլոգիա։ էվոլյուցիա։ 12. e8788 (2022)։
Քելդերեր Մ., Մանիչի Լ.Մ., Կապուտո Ֆ. և Թալհայմեր Մ. Խնձորի այգիներում շարքային տնկում՝ վերատնկման հիվանդությունների դեմ պայքարելու համար. գործնական արդյունավետության ուսումնասիրություն՝ հիմնված մանրէային ցուցանիշների վրա: Plant Soil 357, 381–393 (2012):
Մարտին Պ.Լ., Կրավչիկ Տ., Խոդադադի Ֆ., Աչիմովիչ Ս.Գ. և Պիտեր Կ.Ա. Խնձորների դառը փտումը Միջին Ատլանտյան Միացյալ Նահանգներում. հարուցիչ տեսակների գնահատումը և տարածաշրջանային եղանակային պայմանների ու սորտերի զգայունության ազդեցությունը: Ֆիտոպաթոլոգիա 111, 966–981 (2021):
Քալեն Մ.Գ., Թոմփսոն Լ.Ջ., Քերոլան Ջ.Կ., Սթաութ Ջ.Կ. և Սթենլի Դ.Ա. Ֆունգիցիդներ, մոլախոտերի դեմ պայքարի միջոցներ և մեղուներ. առկա հետազոտությունների և մեթոդների համակարգված վերանայում: PLoS One 14, e0225743 (2019):
Փիլինգ, Է.Դ. և Ջեպսոն, Պ.Ս. EBI ֆունգիցիդների և պիրետրոիդ միջատասպանների սիներգիկ ազդեցությունը մեղուների (Apis mellifera) վրա։ վնասատուները գիտությունը։ 39, 293–297 (1993)։
Մուսեն, Է.Ս., Լոպես, Ջ.Ե. և Պենգ, Ս.Յ. Ընտրված ֆունգիցիդների ազդեցությունը մեղվի թրթուրների՝ Apis mellifera L. (Hymenoptera: Apidae) աճի և զարգացման վրա։ Չորեքշաբթի։ Նտոմոր։ 33, 1151-1154 (2004)։
Վան Դայք, Մ., Մալլեն, Է., Վիքսթեդ, Դ., և ՄաքԱրթ, Ս. Ծառերի այգիներում փոշոտողներին պաշտպանելու համար թունաքիմիկատների օգտագործման վերաբերյալ որոշումների ուղեցույց (Կորնելի համալսարան, 2018):
Իվասակի, Ջ.Մ. և Հոգենդորն, Կ. Մեղուների ազդեցությունը ոչ թունաքիմիկատների վրա. մեթոդների և ներկայացված արդյունքների վերանայում: Գյուղատնտեսություն: Էկոհամակարգ: Չորեքշաբթի: 314, 107423 (2021):
Կոպիտ Ա.Մ., Կլինգեր Ե., Քոքս-Ֆոսթեր Դ.Լ., Ռամիրես Ռ.Ա. և Փիթս-Սինգեր Տ.Լ. Մատակարարման տեսակի և թունաքիմիկատների ազդեցության ազդեցությունը Osmia lignaria (Hymenoptera: Megachilidae) թրթուրային զարգացման վրա։ Չորեքշաբթի։ Նտոմոր։ 51, 240–251 (2022)։
Կոպիտ Ա.Մ. և Փիթս-Սինգեր Թ.Լ. Միայնակ դատարկ բույն ունեցող մեղուների վրա թունաքիմիկատների ազդեցության ուղիները: Չորեքշաբթի: Նտոմոր: 47, 499–510 (2018):
Պան, ՆՏ և այլք։ Ճապոնական մեծահասակ այգեգործական մեղուների (Osmia cornifrons) մոտ թունաքիմիկատների թունավորությունը գնահատելու նոր կլանման կենսափորձարկման արձանագրություն։ Գիտություն։ Հաշվետվություններ 10, 9517 (2020)։