Ֆունգիցիդային հավելումը նվազեցնում է էներգիայի զուտ շահույթը և միկրոբիոմի բազմազանությունը միայնակ որմնադիր մեղուների մոտ:

Շնորհակալություն Nature.com այցելելու համար: Ձեր օգտագործած բրաուզերի տարբերակը ունի սահմանափակ CSS աջակցություն: Լավագույն արդյունքների համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել ձեր բրաուզերի ավելի նոր տարբերակը (կամ անջատել Համատեղելիության ռեժիմը Internet Explorer-ում): Միևնույն ժամանակ, շարունակական աջակցություն ապահովելու համար մենք կայքը ցուցադրում ենք առանց ոճավորման կամ JavaScript-ի:
Ֆունգիցիդները հաճախ օգտագործվում են ծառերի պտուղների ծաղկման ժամանակ և կարող են սպառնալ միջատների փոշոտողներին: Այնուամենայնիվ, քիչ բան է հայտնի այն մասին, թե ինչպես են ոչ մեղու փոշոտողները (օրինակ՝ միայնակ մեղուները, Osmia cornifrons) արձագանքում շփման և համակարգային ֆունգիցիդներին, որոնք սովորաբար օգտագործվում են խնձորների վրա ծաղկման ժամանակ: Այս գիտելիքների բացը սահմանափակում է կարգավորող որոշումները, որոնք որոշում են ֆունգիցիդների ցողման անվտանգ կոնցենտրացիաները և ժամկետները: Մենք գնահատեցինք երկու կոնտակտային ֆունգիցիդների (կապտան և մանկոզեբ) և չորս միջշերտային/ֆիտոհամակարգային ֆունգիցիդների ազդեցությունը (ցիպրոցիկլին, միկլոբուտանիլ, պիրոստրոբին և տրիֆլոքսիստրոբին): Ազդեցություն թրթուրների քաշի ավելացման, գոյատևման, սեռերի հարաբերակցության և բակտերիաների բազմազանության վրա: Գնահատումն իրականացվել է քրոնիկ բանավոր բիովերլուծության միջոցով, որի ընթացքում ծաղկափոշին մշակվել է երեք չափաբաժիններով՝ հիմնվելով դաշտային օգտագործման համար ներկայումս առաջարկվող չափաբաժնի վրա (1X), կես դոզայի (0,5X) և ցածր չափաբաժնի (0,1X): Մանկոզեբի և պիրիտիզոլինի բոլոր չափաբաժինները զգալիորեն նվազեցրին մարմնի քաշը և թրթուրների գոյատևումը: Այնուհետև մենք հաջորդականացրել ենք 16S գենը՝ բնութագրելու mancozeb-ի թրթուրի բակտերիոմը՝ ֆունգիցիդը, որը պատասխանատու է ամենաբարձր մահացության համար: Մենք պարզեցինք, որ մանրէների բազմազանությունը և առատությունը զգալիորեն կրճատվել են թրթուրներում, որոնք սնվել են mancozeb-ով մշակված ծաղկափոշիով: Մեր լաբորատոր արդյունքները ցույց են տալիս, որ այս ֆունգիցիդներից մի քանիսի ցողումը ծաղկման ժամանակ հատկապես վնասակար է O. cornifrons-ի առողջության համար: Այս տեղեկատվությունը տեղին է ապագա կառավարման որոշումների համար՝ կապված պտղատու ծառերի պաշտպանության միջոցների կայուն օգտագործման հետ և հիմք է հանդիսանում փոշոտիչների պաշտպանությանն ուղղված կարգավորող գործընթացների համար:
Միայնակ որմնադիր մեղուն Osmia cornifrons (Hymenoptera: Megachilidae) ներմուծվել է Միացյալ Նահանգներ Ճապոնիայից 1970-ականների վերջին և 1980-ականների սկզբին, և այդ ժամանակից ի վեր տեսակը կարևոր փոշոտող դեր է խաղացել կառավարվող էկոհամակարգերում: Այս մեղվի բնականացված պոպուլյացիաները վայրի մեղուների մոտավորապես 50 տեսակների մի մասն են, որոնք լրացնում են Միացյալ Նահանգների նուշի և խնձորի այգիները փոշոտող մեղուները2,3: Մասոն մեղուները բախվում են բազմաթիվ մարտահրավերների, այդ թվում՝ կենսամիջավայրի մասնատման, հարուցիչների և թունաքիմիկատների3,4: Միջատասպաններից ֆունգիցիդները նվազեցնում են էներգիայի ստացումը, կեր փնտրելը5 և օրգանիզմի բարելավումը6,7: Չնայած վերջին հետազոտությունները ցույց են տալիս, որ մեյսոն մեղուների առողջության վրա ուղղակիորեն ազդում են ընդհանուր և էկտոբակտիկ միկրոօրգանիզմները, 8,9 քանի որ բակտերիաները և սնկերը կարող են ազդել սննդի և իմունային պատասխանների վրա, ֆունգիցիդների ազդեցության ազդեցությունը մասոն մեղուների մանրէաբանական բազմազանության վրա նոր է սկսվում ուսումնասիրվել:
Տարբեր ազդեցությունների (շփման և համակարգային) ֆունգիցիդները ցողում են այգիներում՝ ծաղկելուց առաջ և ընթացքում՝ խնձորի կեղևը, դառը հոտը, շագանակագույն հոտը և փոշոտ բորբոսը բուժելու նպատակով10,11: Ֆունգիցիդները համարվում են անվնաս փոշոտողների համար, ուստի դրանք խորհուրդ են տրվում այգեպաններին ծաղկման շրջանում; Մեղուների կողմից այս ֆունգիցիդների բացահայտումը և ընդունումը համեմատաբար լավ հայտնի է, քանի որ դա ԱՄՆ Շրջակա միջավայրի պաշտպանության գործակալության և բազմաթիվ այլ ազգային կարգավորող գործակալությունների կողմից թունաքիմիկատների գրանցման գործընթացի մաս է կազմում12,13,14: Այնուամենայնիվ, ֆունգիցիդների ազդեցությունը ոչ մեղուների վրա ավելի քիչ հայտնի է, քանի որ դրանք չեն պահանջվում Միացյալ Նահանգներում շուկայավարման թույլտվության համաձայնագրերով15: Բացի այդ, սովորաբար չկան ստանդարտացված արձանագրություններ միայնակ մեղուների փորձարկման համար16,17, և մեղուներին փորձարկող գաղութներ պահպանելը դժվար է18: Տարբեր կառավարվող մեղուների փորձարկումները գնալով ավելի շատ են անցկացվում Եվրոպայում և ԱՄՆ-ում՝ ուսումնասիրելու թունաքիմիկատների ազդեցությունը վայրի մեղուների վրա, և վերջերս ստանդարտացված արձանագրություններ են մշակվել O. cornifrons-ի համար19:
Եղջյուրավոր մեղուները մոնոցիտներ են և կոմերցիոնորեն օգտագործվում են կարասի մշակաբույսերի մեջ՝ որպես մեղրի մեղուների հավելում կամ փոխարինում: Այս մեղուները առաջանում են մարտից ապրիլ ընկած ժամանակահատվածում, իսկ վաղահաս արուները առաջանում են էգերից երեք-չորս օր առաջ: Զուգավորումից հետո էգը ակտիվորեն հավաքում է ծաղկափոշին և նեկտարը՝ խողովակաձև բույնի խոռոչում (բնական կամ արհեստական) ապահովելու համար մի շարք բջիջներ1,20: Ձվերը դրվում են բջիջների ներսում ծաղկափոշու վրա; Այնուհետև էգը կառուցում է կավե պատ, նախքան հաջորդ բջիջը պատրաստելը: Առաջին աստղի թրթուրները փակված են խորիոնի մեջ և սնվում են սաղմնային հեղուկներով։ Երկրորդից հինգերորդ տարիքից (prepupa) թրթուրները սնվում են ծաղկափոշով22: Երբ ծաղկափոշու պաշարն ամբողջությամբ սպառվում է, թրթուրները ձևավորում են կոկոններ, մատղաշ են և հասուն վիճակում հայտնվում են նույն սերմերի պալատում, սովորաբար ամռան վերջին20,23: Մեծահասակները հայտնվում են հաջորդ գարնանը: Մեծահասակների գոյատևումը կապված է էներգիայի զուտ ձեռքբերման (քաշի ավելացման) հետ՝ հիմնված սննդի ընդունման վրա: Այսպիսով, ծաղկափոշու սննդային որակը, ինչպես նաև այլ գործոններ, ինչպիսիք են եղանակը կամ թունաքիմիկատների ազդեցությունը, որոշիչ են գոյատևման և առողջության համար24:
Ծաղկելուց առաջ կիրառվող ինսեկտիցիդները և ֆունգիցիդները կարող են տարբեր աստիճանի շարժվել բույսի անոթների ներսում՝ տրանսլամինարից (օրինակ՝ տերևների վերին մակերևույթից դեպի ստորին մակերես, ինչպես որոշ ֆունգիցիդներ) 25 մինչև իսկապես համակարգային ազդեցություն: , որը կարող է արմատներից թափանցել թագը, կարող է մտնել խնձորի ծաղիկների նեկտար26, որտեղ նրանք կարող են սպանել հասուն O. cornifrons27: Որոշ թունաքիմիկատներ նույնպես թափանցում են փոշու մեջ՝ ազդելով եգիպտացորենի թրթուրների զարգացման վրա և առաջացնելով նրանց մահը19: Այլ ուսումնասիրություններ ցույց են տվել, որ որոշ ֆունգիցիդներ կարող են էապես փոխել O. lignaria28 հարակից տեսակների բնադրման վարքագիծը: Բացի այդ, թունաքիմիկատների ազդեցության սցենարները (ներառյալ ֆունգիցիդները) մոդելավորող լաբորատոր և դաշտային ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ թունաքիմիկատները բացասաբար են ազդում ֆիզիոլոգիայի 22 մորֆոլոգիայի 29 և մեղր մեղուների և որոշ միայնակ մեղուների գոյատևման վրա: Ծաղկման ժամանակ ուղղակիորեն բաց ծաղիկների վրա կիրառվող տարբեր ֆունգիցիդային սփրեյները կարող են աղտոտել մեծահասակների կողմից թրթուրների զարգացման համար հավաքված ծաղկափոշին, որի ազդեցությունը դեռ պետք է ուսումնասիրվի30:
Ավելի ու ավելի է ընդունվում, որ թրթուրների զարգացման վրա ազդում են մարսողական համակարգի փոշին և մանրէաբանական համայնքները: Մեղուների միկրոբիոմը ազդում է այնպիսի պարամետրերի վրա, ինչպիսիք են մարմնի զանգվածը31, նյութափոխանակության փոփոխությունները22 և ախտածինների նկատմամբ զգայունությունը32: Նախորդ ուսումնասիրությունները ուսումնասիրել են զարգացման փուլի, սննդանյութերի և շրջակա միջավայրի ազդեցությունը միայնակ մեղուների միկրոբիոմի վրա: Այս ուսումնասիրությունները բացահայտեցին նմանություններ թրթուրների և ծաղկափոշու միկրոբիոմների կառուցվածքի և առատության մեջ33, ինչպես նաև միայնակ մեղուների տեսակների մեջ՝ Pseudomonas և Delftia բակտերիաների ամենատարածված ցեղերը: Այնուամենայնիվ, թեև ֆունգիցիդները կապված են մեղուների առողջության պաշտպանության ռազմավարությունների հետ, սակայն ֆունգիցիդների ազդեցությունը թրթուրների միկրոբիոտայի վրա բանավոր անմիջական ազդեցության միջոցով մնում է չուսումնասիրված:
Այս ուսումնասիրությունը փորձարկեց ԱՄՆ-ում ծառերի մրգերի վրա օգտագործման համար գրանցված վեց սովորաբար օգտագործվող ֆունգիցիդների իրական չափաբաժինների ազդեցությունը, ներառյալ կոնտակտային և համակարգային ֆունգիցիդները, որոնք բերանով ընդունվում էին աղտոտված սննդից եգիպտացորենի ցեցի թրթուրներին: Մենք պարզեցինք, որ կոնտակտային և համակարգային ֆունգիցիդները նվազեցնում են մեղվի մարմնի քաշի ավելացումը և ավելացնում մահացությունը, ընդ որում ամենածանր հետևանքները կապված են mancozeb-ի և pyrithiopide-ի հետ: Այնուհետև մենք համեմատեցինք մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշու սննդակարգով սնվող թրթուրների մանրէաբանական բազմազանությունը հսկիչ սննդակարգով սնվողների հետ: Մենք քննարկում ենք մահացության հիմքում ընկած հնարավոր մեխանիզմները և վնասատուների և փոշոտիչների ինտեգրված կառավարման (IPPM)36 ծրագրերի հետևանքները:
Կոկոններում ձմեռող հասուն O. cornifrons-ը ստացվել է Fruit Research Center-ից, Biglerville, PA, և պահվել -3-ից 2°C (±0,3°C) ջերմաստիճանում: Փորձից առաջ (ընդհանուր 600 կոկոն): 2022 թվականի մայիսին 100 O. cornifrons կոկոններ ամեն օր տեղափոխվում էին պլաստիկ բաժակների մեջ (50 կոկոն մեկ բաժակ, DI 5 սմ × 15 սմ երկարություն) և անձեռոցիկներ տեղադրվեցին գավաթների ներսում՝ նպաստելու բացմանը և ծամվող հիմք ապահովելու համար՝ նվազեցնելով քարքարոտ մեղուների սթրեսը37: Կոկոններ պարունակող երկու պլաստիկ բաժակներ դնել միջատների վանդակում (30 × 30 × 30 սմ, BugDorm MegaView Science Co. Ltd., Թայվան) 10 մլ սնուցիչներով, որոնք պարունակում են 50% սախարոզայի լուծույթ և պահել չորս օր՝ ապահովելու փակումը և զուգավորումը: 23°C, հարաբերական խոնավությունը 60%, ֆոտոժամանակ 10 լ (ցածր ինտենսիվություն)՝ 14 օր։ 100 զուգավորված էգ և արու վեց օր շարունակ (օրական 100) բաց են թողնվել երկու արհեստական ​​բների մեջ՝ խնձորի գագաթնակետին ծաղկման ժամանակ (ծուղակի բույն. լայնությունը 33,66 × բարձրություն 30,48 × երկարությունը 46,99 սմ; Լրացուցիչ նկար 1): Տեղադրված է Փենսիլվանիայի նահանգային դենդրոպարկում՝ բալի (Prunus cerasus 'Eubank' Sweet Cherry Pie™), դեղձի (Prunus persica 'Contender'), Prunus persica 'PF 27A' Flamin Fury®), տանձի (Pyrus perifolia 'Olympic', Pyrusperifolia 'Olympic', Pyrusperifolia', Pyrusperifolia', Pyrus perifolia', Փենսիլվանիայի նահանգային դենդրոպարկի մոտ: «Shinseiki»), կորոնարիայի խնձորի ծառ (Malus coronaria) և խնձորի ծառերի բազմաթիվ տեսակներ (Malus coronaria, Malus), ընտանի խնձորենի «Co-op 30» Enterprise™, Malus apple tree «Co-Op 31» Winecrisp™, begonia «Freedom» «Begonia» «BegoniaGold»): Յուրաքանչյուր կապույտ պլաստիկ թռչնանոցը տեղավորվում է երկու փայտե տուփերի վրա: Յուրաքանչյուր բույն տուփ պարունակում էր 800 դատարկ քրաֆթ թղթե խողովակներ (պարուրաձև բաց, 0,8 սմ ID × 15 սմ լ) (Jonesville Paper Tube Co., Միչիգան), որոնք տեղադրված էին անթափանց ցելոֆանե խողովակների մեջ (0.7 OD տես Պլաստիկ խցանները (T-1X խրոցակներ) ապահովում են բնադրման վայրեր:
Երկու բնի տուփերն էլ ուղղված էին դեպի արևելք և ծածկված էին կանաչ պլաստիկ այգու ցանկապատով (Everbilt մոդել #889250EB12, բացվածքի չափսը՝ 5 × 5 սմ, 0,95 մ × 100 մ), կրծողների և թռչունների մուտքը կանխելու համար և տեղադրվեցին հողի մակերեսի վրա՝ բնի տուփի հողային տուփերի կողքին: Nest box (Լրացուցիչ նկար 1a): Եգիպտացորենի ցորենի ձվերը հավաքվում էին ամեն օր՝ բներից հավաքելով 30 խողովակ և տեղափոխելով լաբորատորիա: Մկրատով կտրվածք արեք խողովակի վերջում, այնուհետև ապամոնտաժեք պարուրաձև խողովակը, որպեսզի բացահայտվեն բծերի բջիջները: Առանձին ձվերը և դրանց փոշին հեռացվել են կոր սպաթուլայի միջոցով (Microslide tool kit, BioQuip Products Inc., Կալիֆորնիա): Ձվերը ինկուբացվել են խոնավ ֆիլտր թղթի վրա և դրվել Պետրի ամանի մեջ 2 ժամ, նախքան մեր փորձերում օգտագործելը (Լրացուցիչ նկար 1b-d):
Լաբորատորիայում մենք գնահատել ենք խնձորենու ծաղկումից առաջ և ընթացքում կիրառված վեց ֆունգիցիդների բերանային թունավորությունը երեք կոնցենտրացիաներով (0.1X, 0.5X և 1X, որտեղ 1X-ը 100 գալոն ջրի/ակրի համար կիրառված նշագիծն է: Բարձր դաշտային դոզան = դաշտում կոնցենտրացիան): , աղյուսակ 1): Յուրաքանչյուր կոնցենտրացիա կրկնվել է 16 անգամ (n = 16): Երկու կոնտակտային ֆունգիցիդներ (աղյուսակ S1՝ մանկոզեբ 2696.14 ppm և կապտան 2875.88 ppm) և չորս համակարգային ֆունգիցիդներ (աղյուսակ S1՝ պիրիթիոստրոբին 250.14 ppm; տրիֆլօքսիստրոբին 110.06 ppm; միկլոբուտանիլ ազոլ 75 0.12 ppm; ցիպրոդինիլ 280.845 ppm) թունավորությունը մրգերի, բանջարեղենի և դեկորատիվ մշակաբույսերի համար: Մենք ծաղկափոշին հոմոգենացրեցինք աղացիչի միջոցով, 0.20 գ տեղափոխեցինք ջրհորի մեջ (24 ջրհորով Falcon Plate) և ավելացրինք ու խառնեցինք 1 մկլ ֆունգիցիդային լուծույթ՝ 1 մմ խորությամբ ջրհորներով բուրգաձև ծաղկափոշի ստանալու համար, որոնց մեջ տեղադրվեցին ձվերը: Տեղադրեք փոքրիկ սպաթուլայի միջոցով (Լրացուցիչ նկար 1c,d): Falcon ափսեները պահվեցին սենյակային ջերմաստիճանում (25°C) և 70% հարաբերական խոնավության պայմաններում: Մենք համեմատեցինք դրանք վերահսկիչ թրթուրների հետ, որոնք սնվում էին մաքուր ջրով մշակված միատարր ծաղկափոշու սննդով: Մենք գրանցեցինք մահացությունը և չափեցինք թրթուրների քաշը ամեն երկրորդ օրը, մինչև թրթուրները հասան նախաբուծական տարիքի՝ օգտագործելով վերլուծական կշեռք (Fisher Scientific, ճշգրտություն = 0.0001 գ): Վերջապես, սեռերի հարաբերակցությունը գնահատվեց՝ 2.5 ամիս անց բոժոժը բացելով:
ԴՆԹ-ն արդյունահանվել է O. cornifrons-ի ամբողջական թրթուրներից (n = 3 յուրաքանչյուր բուժման պայմանում, mancozeb-ով մշակված և չմշակված ծաղկափոշի) և մենք կատարել ենք մանրէաբանական բազմազանության վերլուծություններ այս նմուշների վրա, հատկապես այն պատճառով, որ mancozeb-ում ամենաբարձր մահացությունը նկատվել է թրթուրների մոտ: ստանալով MnZn: ԴՆԹ-ն ուժեղացվել է, մաքրվել՝ օգտագործելով DNAZymoBIOMICS®-96 MagBead ԴՆԹ փաթեթը (Zymo Research, Irvine, CA) և հաջորդականացվել (600 ցիկլ) Illumina® MiSeq™-ի վրա՝ օգտագործելով v3 փաթեթը: Բակտերիալ 16S ռիբոսոմային ՌՆԹ գեների նպատակային հաջորդականացումն իրականացվել է Quick-16S™ NGS Library Prep Kit-ի միջոցով (Zymo Research, Irvine, CA) օգտագործելով պրայմերներ, որոնք ուղղված են 16S rRNA գենի V3-V4 շրջանին: Բացի այդ, 18S հաջորդականացումն իրականացվել է PhiX 10% ներառման միջոցով, իսկ ուժեղացումն իրականացվել է 18S001 և NS4 այբբենարանի զույգի միջոցով:
Ներմուծել և մշակել զուգակցված ընթերցումները39՝ օգտագործելով QIIME2 խողովակաշարը (v2022.11.1): Այս ընթերցումները կտրվեցին և միաձուլվեցին, և քիմերային հաջորդականությունները հեռացվեցին QIIME2-ի DADA2 հավելվածի միջոցով (qiime dada2 աղմուկի զուգավորում)40: 16S և 18S դասերի առաջադրանքները կատարվել են Classify-sklearn օբյեկտների դասակարգիչի և նախապես պատրաստված արտեֆակտ silva-138-99-nb դասակարգիչի միջոցով:
Բոլոր փորձարարական տվյալները ստուգվել են նորմալության (Շապիրո-Վիլքս) և շեղումների միատարրության համար (Լևենի թեստ): Քանի որ տվյալների հավաքածուն չէր համապատասխանում պարամետրային վերլուծության ենթադրություններին, և փոխակերպումը չկարողացավ ստանդարտացնել մնացորդները, մենք կատարեցինք ոչ պարամետրիկ երկկողմանի ԱՆՈՎԱ (Kruskal-Wallis) երկու գործոնով [ժամանակ (երեք փուլ 2, 5 և 8 օրվա միավորներ) և ֆունգիցիդով]՝ գնահատելու բուժման ազդեցությունը թրթուրների թարմ քաշի վրա: Wilcoxon թեստ. Մենք օգտագործեցինք ընդհանրացված գծային մոդելը (GLM)՝ Poisson բաշխմամբ՝ համեմատելու ֆունգիցիդների ազդեցությունը գոյատևման վրա երեք ֆունգիցիդների կոնցենտրացիաներում41,42: Դիֆերենցիալ առատության վերլուծության համար ամպլիկոնների հաջորդականության տարբերակների (ASVs) թիվը փլուզվել է սեռի մակարդակում: 16S (սեռի մակարդակ) և 18S հարաբերական առատություն օգտագործող խմբերի միջև դիֆերենցիալ առատության համեմատությունները կատարվել են դիրքի, մասշտաբի և ձևի (GAMLSS) ընդհանրացված հավելումների մոդելի միջոցով՝ բետա զրոյական ուռճացված (BEZI) ընտանիքի բաշխումներով, որոնք մոդելավորվել են մակրոյով: Microbiome R43-ում (v1.1): 1). Հեռացրեք միտոքոնդրիումային և քլորոպլաստների տեսակները դիֆերենցիալ վերլուծությունից առաջ: 18S-ի տարբեր տաքսոնոմիական մակարդակների պատճառով յուրաքանչյուր տաքսոնի միայն ամենացածր մակարդակն է օգտագործվել դիֆերենցիալ վերլուծությունների համար: Բոլոր վիճակագրական վերլուծությունները կատարվել են R-ի միջոցով (v. 3.4.3., CRAN նախագիծ) (Team 2013):
Mancozeb-ի, pyrithiostrobin-ի և trifloxystrobin-ի ազդեցությունը զգալիորեն նվազեցրեց մարմնի քաշի ավելացումը O. cornifrons-ում (նկ. 1): Այս ազդեցությունները հետևողականորեն նկատվել են գնահատված բոլոր երեք չափաբաժինների համար (նկ. 1ա–գ): Ցիկլոստրոբինը և միկլոբութանիլը զգալիորեն չեն նվազեցրել թրթուրների քաշը:
Ցողունային ծակի թրթուրների միջին թարմ քաշը չափվել է երեք ժամանակային կետում՝ չորս սննդային բուժման ընթացքում (միատարր ծաղկափոշու կեր + ֆունգիցիդ. հսկողություն, 0.1X, 0.5X և 1X չափաբաժիններ): (ա) Ցածր դոզան (0.1X). ​​առաջին անգամ կետ (օր 1): χ2: 30.99, DF = 6; P < 0,0001, երկրորդ անգամ կետ (օր 5): 22,83, DF = 0,0009; երրորդ անգամ; կետ (օր 8): χ2: 28.39, DF = 6; (բ) կես դոզան (0.5X). առաջին անգամ կետ (օր 1): χ2: 35.67, DF = 6; P < 0,0001, երկրորդ անգամ կետ (օր առաջին): ): χ2: 15,98, DF = 6; P = 0,0090; երրորդ անգամ կետ (օր 8) χ2: 16.47, DF = 6; (գ) Կայքում կամ ամբողջական դոզան (1X). առաջին անգամ կետ (օր 1) χ2: 20.64, P = 6; P = 0.0326, երկրորդ անգամ կետ (օր 5): χ2: 22.83, DF = 6; P = 0,0009; երրորդ անգամ կետ (օր 8): χ2: 28.39, DF = 6; շեղումների ոչ պարամետրիկ վերլուծություն: Ձողերը ներկայացնում են զույգ համեմատությունների միջին ± SE (α = 0,05) (n = 16) *P ≤ 0,05, **P ≤ 0,001, ***P ≤ 0,0001:
Նվազագույն դոզանով (0.1X) թրթուրների մարմնի քաշը կրճատվել է 60%-ով` տրիֆլոքսիստրոբինով, 49%-ով` մանկոզեբով, 48%-ով` միկլոբուտանիլով և 46%-ով` պիրիտիստրոբինի հետ (նկ. 1ա): Դաշտային չափաբաժնի կեսին (0.5X) ենթարկվելիս մանկոզեբի թրթուրների մարմնի քաշը կրճատվել է 86%-ով, պիրիտիոստրոբինը 52%-ով և տրիֆլոքսիստրոբինը 50%-ով (նկ. 1բ): Մանկոզեբի լրիվ դաշտային դոզան (1X) նվազեցրեց թրթուրների քաշը 82%-ով, պիրիտիոստրոբինը 70%-ով, իսկ տրիֆլոքսիստրոբինը, միկլոբուտանիլը և սանգարդը մոտ 30%-ով (նկ. 1գ):
Մահացությունն ամենաբարձրն էր մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշով սնված թրթուրների շրջանում, որին հաջորդում էին պիրիտիոստրոբինը և տրիֆլոքսիստրոբինը: Մահացությունն ավելացել է մանկոզեբի և պիրիտիզոլինի չափաբաժինների աճով (նկ. 2, աղյուսակ 2): Այնուամենայնիվ, եգիպտացորենի ծակից մահացությունը միայն մի փոքր ավելացավ, երբ ավելացավ տրիֆլոքսիստրոբինի կոնցենտրացիաները. ցիպրոդինիլը և կապտանն էապես չեն բարձրացրել մահացությունը՝ համեմատած հսկիչ բուժման հետ:
Ծաղկող ճանճերի թրթուրների մահացությունը համեմատվել է վեց տարբեր ֆունգիցիդներով առանձին մշակված ծաղկափոշու ընդունումից հետո: Mancozeb-ը և pentopyramide-ն ավելի զգայուն էին եգիպտացորենի թրթուրների նկատմամբ բանավոր ազդեցության նկատմամբ (GLM: χ = 29,45, DF = 20, P = 0,0059) (գիծ, թեքություն = 0,29, P <0,001; թեքություն = 0,24, P <0):
Միջին հաշվով, բոլոր բուժումների ընթացքում հիվանդների 39,05%-ը եղել են կին, իսկ 60,95%-ը՝ տղամարդիկ: Վերահսկիչ բուժումների շարքում կանանց մասնաբաժինը եղել է 40% թե՛ ցածր չափաբաժիններով (0,1X) և թե՛ կիսադոզայով (0,5X) ուսումնասիրություններում, և 30%՝ դաշտային դոզանով (1X) ուսումնասիրություններում: 0,1X չափաբաժնի դեպքում, մանկոզեբով և միկլոբուտանիլով բուժվող ծաղկափոշով սնվող թրթուրներից, մեծահասակների 33,33%-ը եղել են էգ, մեծահասակների 22%-ը` էգ, հասուն թրթուրների 44%-ը` էգ, հասուն թրթուրների 44%-ը` էգ: էգ, չափահաս թրթուրների 41%-ը էգ էին, իսկ հսկիչները՝ 31%-ը (նկ. 3ա): 0,5 անգամ ավելի մեծ չափաբաժիններով, մանկոզեբի և պիրիտիոստրոբինի խմբում հասուն որդերի 33%-ը եղել է իգական սեռի, 36%-ը՝ տրիֆլոքսիստրոբինի խմբում, 41%-ը՝ միկլոբուտանիլում և 46%-ը՝ ցիպրոստրոբինի խմբում: Այս ցուցանիշը խմբում կազմել է 53%: կապտանների խմբում և 38%՝ հսկիչ խմբում (նկ. 3բ): 1X չափաբաժնի դեպքում mancozeb խմբի 30%-ը կանայք էին, 36%-ը՝ պիրիտիոստրոբինի խումբը, 44%-ը՝ տրիֆլոքսիստրոբին խումբը, 38%-ը՝ միկլոբուտանիլը, վերահսկիչ խմբի 50%-ը կանայք էին՝ 38.5% (նկ. 3c):
Թրթուրային փուլի ֆունգիցիդների ազդեցությունից հետո էգ և արու փորածուների տոկոսը: ա) Ցածր դոզան (0.1X): բ) Կես դոզա (0,5X): գ) դաշտային դոզան կամ լրիվ չափաբաժին (1X):
16S հաջորդականության վերլուծությունը ցույց է տվել, որ բակտերիաների խումբը տարբերվում է մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշով սնվող և չմշակված ծաղկափոշով սնվող թրթուրների միջև (նկ. 4ա): Ծաղկափոշով սնվող չմշակված թրթուրների մանրէաբանական ինդեքսն ավելի բարձր էր, քան մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշով սնվող թրթուրներինը (նկ. 4բ): Չնայած խմբերի միջև հարստության նկատված տարբերությունը վիճակագրորեն նշանակալի չէր, այն զգալիորեն ավելի ցածր էր, քան չմշակված ծաղկափոշով սնվող թրթուրների դեպքում (նկ. 4գ): Հարաբերական առատությունը ցույց է տվել, որ հսկիչ ծաղկափոշով սնվող թրթուրների միկրոբիոտան ավելի բազմազան է, քան մանկոզեբով մշակված թրթուրներով սնվող թրթուրները (նկ. 5ա): Նկարագրական վերլուծությունը բացահայտեց 28 ցեղերի առկայությունը հսկողության և մանկոզեբով մշակված նմուշներում (նկ. 5բ): գ 18S հաջորդականության օգտագործմամբ վերլուծությունը էական տարբերություններ չի հայտնաբերել (Լրացուցիչ նկար 2):
SAV պրոֆիլները, որոնք հիմնված են 16S հաջորդականությունների վրա, համեմատվել են Շենոնի հարստության հետ և դիտարկվել են հարստությունը ֆիլմի մակարդակում: ա) Հիմնական կոորդինատային վերլուծություն (PCoA)՝ հիմնված մանրէների ընդհանուր կառուցվածքի վրա չմշակված ծաղկափոշով սնվող կամ հսկիչ (կապույտ) և մանկոզեբով սնվող թրթուրներում (նարնջագույն): Յուրաքանչյուր տվյալների կետ ներկայացնում է առանձին նմուշ: PCoA-ն հաշվարկվել է՝ օգտագործելով Բրեյ-Քուրտիսի հեռավորությունը բազմաչափ t բաշխման: Օվալները ներկայացնում են 80% վստահության մակարդակը: (բ) Boxplot, չմշակված Shannon հարստության տվյալները (միավորներ) և c. Դիտելի հարստություն. Տուփային սյուժեները ցույց են տալիս միջանկյալ գծի, միջքառորդական տիրույթի (IQR) և 1,5 × IQR (n = 3) տուփեր:
Մանկոզեբով մշակված և չմշակված ծաղկափոշիով սնվող թրթուրների մանրէաբանական համայնքների կազմը: ա) Մանրէաբանական սեռերի հարաբերական առատությունը նշվում է թրթուրներում: բ) հայտնաբերված մանրէաբանական համայնքների ջերմային քարտեզ: Դելֆտիա (հավանականության հարաբերակցություն (OR) = 0,67, P = 0,0030) և Pseudomonas (OR = 0,3, P = 0,0074), միկրոբակտերիա (OR = 0,75, P = 0,0617) (OR = 1,5, P = 0,0060); Ջերմային քարտեզի տողերը հավաքվում են՝ օգտագործելով հարաբերակցության հեռավորությունը և միջին կապը:
Մեր արդյունքները ցույց են տալիս, որ կոնտակտային (mancozeb) և համակարգային (pyrostrobin և trifloxystrobin) ֆունգիցիդների բանավոր ազդեցությունը, որոնք լայնորեն կիրառվում են ծաղկման ժամանակ, զգալիորեն նվազեցնում են քաշի ավելացումը և ավելացնում եգիպտացորենի թրթուրների մահացությունը: Բացի այդ, mancozeb-ը զգալիորեն նվազեցրեց միկրոբիոմի բազմազանությունն ու հարստությունը նախադպրոցական փուլում: Միկլոբուտանիլը՝ մեկ այլ համակարգային ֆունգիցիդ, զգալիորեն նվազեցրեց թրթուրների մարմնի քաշի ավելացումը բոլոր երեք չափաբաժիններով: Այս ազդեցությունն ակնհայտ էր երկրորդ (օր 5) և երրորդ (օր 8) ժամանակային կետերում: Ի հակադրություն, ցիպրոդինիլը և կապտանն էապես չեն նվազեցրել քաշի ավելացումը կամ գոյատևումը հսկիչ խմբի համեմատ: Մեր տեղեկություններով, այս աշխատանքն առաջինն է, որը որոշել է տարբեր ֆունգիցիդների դաշտային դրույքաչափերի ազդեցությունը, որոնք օգտագործվում են եգիպտացորենի մշակաբույսերը պաշտպանելու համար՝ փոշու ուղղակի ազդեցության միջոցով:
Բոլոր ֆունգիցիդային բուժումները զգալիորեն նվազեցրին մարմնի քաշի ավելացումը՝ համեմատած հսկիչ բուժման հետ: Մանկոզեբը ամենամեծ ազդեցությունն է ունեցել թրթուրների մարմնի քաշի ավելացման վրա՝ միջինը 51% կրճատմամբ, որին հաջորդում է պիրիտիոստրոբինը: Այնուամենայնիվ, այլ ուսումնասիրություններ չեն արձանագրել ֆունգիցիդների դաշտային չափաբաժինների անբարենպաստ ազդեցությունը թրթուրների փուլերի վրա44: Չնայած պարզվել է, որ դիթիոկարբամատ բիոիդներն ունեն ցածր սուր թունավորություն45, էթիլեն բիսդիթիոկարբամատները (EBDCS), ինչպիսին է mancozeb-ը, կարող են քայքայվել մինչև միզանյութի էթիլեն սուլֆիդի: Հաշվի առնելով այլ կենդանիների վրա իր մուտագեն ազդեցությունները, քայքայման այս արտադրանքը կարող է պատասխանատու լինել դիտարկված հետևանքների համար46,47: Նախորդ ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ էթիլենի թիուրիայի ձևավորման վրա ազդում են այնպիսի գործոններ, ինչպիսիք են բարձր ջերմաստիճանը48, խոնավության մակարդակը49 և արտադրանքի պահպանման երկարությունը50: Բիոիդների պահպանման պատշաճ պայմանները կարող են մեղմել այդ կողմնակի ազդեցությունները: Բացի այդ, Սննդամթերքի անվտանգության եվրոպական վարչությունը մտահոգություն է հայտնել պիրիթիոպիդի թունավորության վերաբերյալ, որն ապացուցված է, որ քաղցկեղածին է այլ կենդանիների մարսողական համակարգերի համար51:
Mancozeb-ի, pyrithiostrobin-ի և trifloxystrobin-ի բանավոր ընդունումը մեծացնում է եգիպտացորենի թրթուրների մահացությունը: Ի հակադրություն, միկլոբութանիլը, ցիպրոցիկլինը և կապտանը ոչ մի ազդեցություն չեն ունեցել մահացության վրա: Այս արդյունքները տարբերվում են Ladurner et al.52-ի արդյունքներից, որոնք ցույց են տվել, որ կապտանն էապես նվազեցրել է հասուն O. lignaria-ի և Apis mellifera L.-ի (Hymenoptera, Apisidae) գոյատևումը: Բացի այդ, պարզվել է, որ ֆունգիցիդները, ինչպիսիք են կապտանը և բոսկալիդը, առաջացնում են թրթուրների մահացություն52,53,54 կամ փոխում են կերակրման վարքագիծը55: Այս փոփոխություններն իրենց հերթին կարող են ազդել ծաղկափոշու սննդային որակի և, ի վերջո, թրթուրային փուլի էներգիայի ստացման վրա: Վերահսկիչ խմբում նկատված մահացությունը համահունչ էր այլ ուսումնասիրությունների 56,57-ին:
Մեր աշխատանքում նկատված արական սեռերի հարաբերակցությունը կարող է բացատրվել այնպիսի գործոններով, ինչպիսիք են անբավարար զուգավորումը և վատ եղանակային պայմանները ծաղկման ժամանակ, ինչպես նախկինում առաջարկվել էր O. cornuta-ի համար Vicens-ի և Bosch-ի կողմից: Թեև մեր հետազոտության էգերն ու արուները չորս օր ունեին զուգավորման համար (ժամանակաշրջան, որը սովորաբար համարվում է բավարար հաջող զուգավորման համար), մենք միտումնավոր նվազեցրեցինք լույսի ինտենսիվությունը՝ նվազագույնի հասցնելու սթրեսը: Այնուամենայնիվ, այս փոփոխությունը կարող է ակամա խանգարել զուգավորման գործընթացին61: Բացի այդ, մեղուները մի քանի օր անբարենպաստ եղանակ են ունենում, ներառյալ անձրևը և ցածր ջերմաստիճանը (<5°C), ինչը նույնպես կարող է բացասաբար ազդել զուգավորման հաջողության վրա4,23:
Չնայած մեր ուսումնասիրությունը կենտրոնացած էր թրթուրների ամբողջ միկրոբիոմի վրա, մեր արդյունքները պատկերացում են տալիս բակտերիալ համայնքների միջև հնարավոր հարաբերությունների մասին, որոնք կարող են կարևոր լինել մեղուների սնուցման և ֆունգիցիդների ազդեցության համար: Օրինակ՝ մանկոզեբով մշակված ծաղկափոշին սնվող թրթուրները զգալիորեն նվազեցրել են մանրէաբանական համայնքի կառուցվածքը և առատությունը՝ համեմատած չմշակված ծաղկափոշու սնվող թրթուրների հետ: Չմշակված ծաղկափոշու սպառող թրթուրների մեջ գերակշռում էին Proteobacteria և Actinobacteria բակտերիաների խմբերը և հիմնականում aerobic կամ facultatively aerobic: Հայտնի է, որ դելֆտի բակտերիաները, որոնք սովորաբար կապված են միայնակ մեղուների տեսակների հետ, ունեն հակաբիոտիկ ակտիվություն, ինչը ցույց է տալիս պոտենցիալ պաշտպանիչ դեր պաթոգենների դեմ: Մեկ այլ բակտերիաների տեսակ՝ Pseudomonas-ը, առատ էր այն թրթուրներում, որոնք սնվում էին չմշակված ծաղկափոշու մեջ, բայց զգալիորեն կրճատվում էր մանկոզեբով մշակված թրթուրներում: Մեր արդյունքները հաստատում են նախորդ հետազոտությունները, որոնք բացահայտում էին Pseudomonas-ը որպես O. bicornis35-ի և այլ միայնակ իշամեղուների34 ամենաառատ սեռերից մեկը: Չնայած O. cornifrons-ի առողջության մեջ Pseudomonas-ի դերի վերաբերյալ փորձարարական ապացույցները չեն ուսումնասիրվել, ցույց է տրվել, որ այս բակտերիան նպաստում է պաշտպանիչ տոքսինների սինթեզին Paederus fuscipes-ում և խթանում է արգինինի նյութափոխանակությունը in vitro 35, 65: Microbacterium-ը ևս մեկ սեռ է, որը բացահայտվել է մեր ուսումնասիրության մեջ, որը հաղորդվում է, որ մեծ քանակությամբ առկա է սովի պայմաններում սև զինվորական ճանճերի թրթուրներում66: O. cornifrons larvae-ում միկրոբակտերիաները կարող են նպաստել սթրեսային պայմաններում աղիքի միկրոբիոմի հավասարակշռությանը և առաձգականությանը: Բացի այդ, Rhodococcus-ը հանդիպում է O. cornifrons larvae-ում և հայտնի է իր դետոքսիկացիոն կարողություններով67: Այս ցեղը հանդիպում է նաև A. florea-ի աղիքներում, բայց շատ քիչ առատությամբ68: Մեր արդյունքները ցույց են տալիս բազմաթիվ գենետիկական տատանումների առկայությունը բազմաթիվ մանրէաբանական տաքսոնների մեջ, որոնք կարող են փոխել թրթուրներում նյութափոխանակության գործընթացները: Այնուամենայնիվ, անհրաժեշտ է O. cornifrons-ի ֆունկցիոնալ բազմազանության ավելի լավ պատկերացում:
Ամփոփելով, արդյունքները ցույց են տալիս, որ mancozeb-ը, pyrithiostrobin-ը և trifloxystrobin-ը նվազեցնում են մարմնի քաշի ավելացումը և ավելացնում եգիպտացորենի թրթուրների մահացությունը: Չնայած աճում է անհանգստությունը փոշոտիչների վրա ֆունգիցիդների ազդեցության վերաբերյալ, անհրաժեշտություն կա ավելի լավ հասկանալու այդ միացությունների մնացորդային մետաբոլիտների ազդեցությունը: Այս արդյունքները կարող են ներառվել փոշոտիչների ինտեգրված կառավարման ծրագրերի առաջարկությունների մեջ, որոնք օգնում են ֆերմերներին խուսափել որոշ ֆունգիցիդների օգտագործումից պտղատու ծառերի ծաղկումից առաջ և ընթացքում՝ ընտրելով ֆունգիցիդներ և փոփոխելով կիրառման ժամկետները, կամ խրախուսելով ավելի քիչ վնասակար այլընտրանքների օգտագործումը: 36: Այս տեղեկատվությունը կարևոր է առաջարկությունների մշակման համար: թունաքիմիկատների օգտագործման վերաբերյալ, ինչպես օրինակ՝ գոյություն ունեցող ցողման ծրագրերի կարգավորումը և ցողելու ժամանակի փոփոխությունը ֆունգիցիդների ընտրության կամ ավելի քիչ վտանգավոր այլընտրանքների օգտագործման խթանման ժամանակ: Լրացուցիչ հետազոտություններ են անհրաժեշտ ֆունգիցիդների անբարենպաստ ազդեցության վերաբերյալ սեռերի հարաբերակցության, կերակրման վարքագծի, աղիքների միկրոբիոմի և եգիպտացորենի ծակի քաշի կորստի և մահացության հիմքում ընկած մոլեկուլային մեխանիզմների վերաբերյալ:
Աղբյուրի 1, 2 և 3 Նկար 1 և 2-ի տվյալները պահվել են figshare տվյալների DOI պահոցում՝ https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996245 և https://doi.org/10.6084/m9: figshare.24996233. Ընթացիկ ուսումնասիրության մեջ վերլուծված հաջորդականությունները (նկ. 4, 5) հասանելի են NCBI SRA-ի պահոցում՝ PRJNA1023565 մուտքային համարով:
Bosch, J. and Kemp, WP Մեղր մեղուների տեսակների զարգացում և հաստատում որպես գյուղատնտեսական մշակաբույսերի փոշոտիչներ. Osmia սեռի օրինակ: (Hymenoptera: Megachilidae) և պտղատու ծառեր: ցուլ. Ntomore. ռեսուրս. 92, 3–16 (2002):
Parker, MG et al. Նյու Յորքի և Փենսիլվանիայի խնձոր արտադրողների շրջանում փոշոտման պրակտիկա և այլընտրանքային փոշոտիչների ընկալում: թարմացնել։ Գյուղատնտեսություն. սննդի համակարգեր. 35, 1–14 (2020):
Koch I., Lonsdorf EW, Artz DR, Pitts-Singer TL և Ricketts TH Նուշի փոշոտման էկոլոգիա և տնտեսագիտություն՝ օգտագործելով բնիկ մեղուները: J. Տնտեսագիտություն. Ntomore. 111, 16–25 (2018):
Lee, E., He, Y., and Park, Y.-L. Կլիմայի փոփոխության ազդեցությունը տրագոպանի ֆենոլոգիայի վրա. հետևանքներ բնակչության կառավարման համար. Բարձրանալ. Փոփոխություն 150, 305–317 (2018):
Artz, DR և Pitts-Singer, TL Ֆունգիցիդների և օժանդակ սփրեյների ազդեցությունը երկու կառավարվող միայնակ մեղուների բնադրման վարքագծի վրա (Osmia lignaria և Megachile rotundata): PloS One 10, e0135688 (2015):
Beauvais, S. et al. Ցածր թունավոր մշակաբույսերի ֆունգիցիդը (ֆենբուկոնազոլ) խանգարում է տղամարդկանց վերարտադրողական որակի ազդանշաններին, ինչը հանգեցնում է վայրի միայնակ մեղուների զուգավորման հաջողության նվազեցմանը: J. Հավելվածներ. էկոլոգիա։ 59, 1596–1607 (2022):
Sgolastra F. et al. Նեոնիկոտինոիդային միջատասպանները և էրգոստերոլի կենսասինթեզը ճնշում են մեղուների երեք տեսակների սիներգիկ ֆունգիցիդների մահացությունը: Վնասատուների դեմ պայքար. գիտությունը։ 73, 1236–1243 (2017):
Kuhneman JG, Gillung J, Van Dyck MT, Fordyce ՌԴ. և Danforth BN Միայնակ կրետի թրթուրները փոխում են բակտերիաների բազմազանությունը, որն ապահովում է ծաղկափոշին ցողունային մեղուներին Osmia cornifrons (Megachilidae): ճակատ. միկրոօրգանիզմ. 13, 1057626 (2023):
Dharampal PS, Danforth BN և Steffan SA Ֆերմենտացված ծաղկափոշու էկտոսիմբիոտիկ միկրոօրգանիզմները նույնքան կարևոր են միայնակ մեղուների զարգացման համար, որքան բուն փոշին: էկոլոգիա։ էվոլյուցիա. 12. e8788 (2022).
Kelderer M, Manici LM, Caputo F և Thalheimer M. Խնձորի այգիներում միջշարային տնկում վերցման հիվանդությունները վերահսկելու համար. մանրէաբանական ցուցանիշների վրա հիմնված արդյունավետության գործնական ուսումնասիրություն: Plant Soil 357, 381–393 (2012).
Մարտին Պ.Լ., Կրավչիկ Տ., Խոդադադի Ֆ., Աչիմովիչ Ս.Գ. և Պիտեր Կ.Ա. Խնձորի դառը փտում Ատլանտյան Միացյալ Նահանգներում. պատճառական տեսակների գնահատում և տարածաշրջանային եղանակային պայմանների ազդեցությունը և սորտերի զգայունությունը: Phytopathology 111, 966–981 (2021):
Cullen MG, Thompson LJ, Carolan JK, Stout JK. և Stanley DA Ֆունգիցիդներ, թունաքիմիկատներ և մեղուներ. գոյություն ունեցող հետազոտությունների և մեթոդների համակարգված վերանայում: PLoS One 14, e0225743 (2019):
Pilling, ED and Jepson, PC EBI ֆունգիցիդների և պիրետրոիդ միջատասպանների սիներգետիկ ազդեցությունները մեղուների վրա (Apis mellifera): վնասում է գիտությունը. 39, 293–297 (1993):
Mussen, EC, Lopez, JE and Peng, CY Ընտրված ֆունգիցիդների ազդեցությունը մեղուների թրթուրների աճի և զարգացման վրա Apis mellifera L. (Hymenoptera: Apidae): չորեքշաբթի. Ntomore. 33, 1151-1154 (2004):
Van Dyke, M., Mullen, E., Wickstead, D., and McArt, S. Decision Guide for Pesticide Use for Protect Pollinators in Tree Gardens (Cornell University, 2018):
Iwasaki, JM and Hogendoorn, K. Մեղուների ազդեցությունը ոչ թունաքիմիկատների նկատմամբ. մեթոդների վերանայում և հաղորդված արդյունքներ: Գյուղատնտեսություն. էկոհամակարգ. չորեքշաբթի. 314, 107423 (2021):
Kopit AM, Klinger E, Cox-Foster DL, Ramirez RA. և Pitts-Singer TL Մատակարարման տեսակի և թունաքիմիկատների ազդեցության ազդեցությունը Osmia lignaria-ի թրթուրների զարգացման վրա (Hymenoptera: Megachilidae): չորեքշաբթի. Ntomore. 51, 240–251 (2022).
Kopit AM և Pitts-Singer TL Թունաքիմիկատների ազդեցության ուղիները միայնակ դատարկ բույն մեղուների նկատմամբ: չորեքշաբթի. Ntomore. 47, 499–510 (2018):
Pan, NT et al. Նոր կուլ տալու բիովերլուծության արձանագրություն՝ չափահաս ճապոնական այգու մեղուների մոտ թունաքիմիկատների թունավորությունը գնահատելու համար (Osmia cornifrons): գիտությունը։ Հաշվետվություններ 10, 9517 (2020):